Enzymimmunanalys - en beskrivning av metoden, fördelar och nackdelar, ett transkript av resultaten

Modern diagnostik är inte komplett utan mycket känsliga tester i laboratoriet. Tidigare genomförde läkare olika mikroskopiska flerstegsstudier för att fastställa orsaken till sjukdomen och upptäcka det orsakande medlet för infektionen. Idag, för att motbevisa eller bekräfta den första diagnosen, måste du göra det enda testet - enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA). Denna laboratoriestudie hjälper till att bedöma människors hälsa och diagnostisera hematologiska, onkologiska, autoimmuna, smittsamma patologier..

Vad är en enzymimmunanalys

Enzymbunden immunosorbentanalys är ett modernt laboratorieblodtest för närvaro av antigener, antikroppar mot patogener och sjukdomsvirus i den. ELISA-metoden hjälper läkaren att identifiera sjukdomens etiologi, bestämma dess fas, ursprungsålder, risk för människor och göra nödvändiga anpassningar av behandlingen. Den enzymbundna immunosorbentanalysen testas oftast med avseende på närvaro av antikroppar i grupperna M och G. Vad är de??

När en patogen mikroorganism kommer in i blodomloppet inkluderar immunsystemet en skyddande reaktion i form av frisättning av antikroppar (immunoglobuliner). Dessa ämnen binder till cellen och avslöjar om det är en del av kroppen eller har kommit från utsidan. Om systemet har bestämt att mikroorganismen är främmande ökar antalet antikroppar för att bekämpa det patogena viruset. Immunoglobuliner (Ig) är av flera typer: vissa förekommer under infektionsperioden, andra kvarstår under hela livet och utvecklar en stabil immunitet. Antikroppar i medicin betecknas: A, D, E, M, G.

ELISA undersöker blodet, även om det finns andra typer av enzymbunden immunosorbentanalys. Som regel skiljer de sig i typen av vätska som tas, på basis av vilken kompositionen studeras ytterligare och närvaron av antigener bestäms. I detta fall tas både mänskligt blod och andra vätskor för forskning:

  • glashaltigt innehåll;
  • slem från livmoderhalskanalen och urinröret;
  • Amnionvätska;
  • smetar;
  • cerebrospinalvätska.

Indikationer för utnämning

En enzymbunden immunosorbentanalys hjälper till att identifiera tumörmarkörer (faktorer av cancer-embryonantigen, tumörnekros, prostatadenom och andra). Analysen bestämmer också sköldkörtelsjukdomar genom att undersöka hormonella inneslutningar i blodserum (prolaktin, progesteron, sköldkörtelstimulerande hormon (TSH), testosteron). ELISA hjälper till att upptäcka förekomsten av skador på kroppen av tarmparasiter och helminter. Dessutom förskrivs studien för patienter som behöver bestämma närvaron av följande sjukdomar:

  • allergiska reaktioner;
  • immunbrist;
  • åkommor av viralt ursprung (hepatit, herpes, Epstein-Barr-virus, cytomegalovirus);
  • sexuellt överförda sjukdomar STD (ureaplasma, syfilis, trichomonas, klamydia, mycoplasma);
  • leversjukdomar;
  • neurosyfilis (infektiös lesion i centrala nervsystemet (centrala nervsystemet)).

Ett ELISA-blodprov utförs ofta under en preoperativ omfattande undersökning för att bestämma hormonnivåer och bedöma kvaliteten på behandlingen. Den höga noggrannheten i uppgifterna hjälper läkaren att få en uppfattning om en detaljerad bild av hälsotillståndet. Dessutom uppnås resultat under en kort tidsperiod, vilket gör att du kan spåra dynamiken i sjukdomen.

Metodfördelar

De obestridliga fördelarna med ELISA-metoden är hög känslighet, d.v.s. förmågan att bestämma den önskade substansen, även i låga koncentrationer; och specificitet, vilket innebär en felfri diagnos. Dessutom har studien av blodserum av ELISA följande fördelar:

  • möjligheten att genomföra förfarandet under graviditet;
  • dechiffrering av resultaten hjälper till att identifiera stadiet och utvecklingen av sjukdomen;
  • exakt bestämning av TSH-koncentrationen för att fastställa en patologi eller norm;
  • möjligheten till en fullständig diagnos i de tidiga stadierna av sjukdomen;
  • tidig upptäckt av STD: er;
  • ELISA är möjlig även med temperatursvingningar i miljön;
  • snabb tidsfrist för att tillhandahålla resultatet;
  • bekvämlighet och enkelhet i analysen;
  • hög känslighet;
  • forskningsreagens kan lagras i ungefär ett år;
  • möjligheten till en massundersökning i infektionsfocierna;
  • tidig upptäckt av parasiter;
  • spåra utvecklingen av en infektionssjukdom;
  • minimal påverkan av den mänskliga faktorn;
  • analys kräver en liten mängd biomaterial.

nackdelar

Den huvudsakliga nackdelen med en enzymbunden immunosorbentanalys är att läkaren, när han utför en studie, först måste ha ett antagande om sjukdomens natur. Vid diagnos av infektionssjukdomar är det omöjligt att oavsiktligt hitta patogenen och fastställa dess enzymbundna immunsorberande egenskaper. Testet kan endast indikera närvaron av antikroppar i patientens blod, vilket indirekt indikerar förekomsten av en skadlig mikroorganism.

Vid brott mot exekveringstekniken eller felaktig beredning kan analysen dessutom visa ett falskt positivt eller falskt negativt resultat. Studien av blodserum ELISA är en korrekt, men samtidigt dyr metod, så den bör konsulteras i extrema fall. Tolkning av resultaten ska bara lita på av en kvalificerad professionell.

Träning

En enzymkopplad immunosorbentanalys måste genomföras, i enlighet med läkarnas rekommendationer, eftersom Studiens resultat påverkas ofta av olika externa faktorer. Grundläggande regler för förberedelser för IFA:

  • venöst blod bör tas strikt på tom mage (normalt, den sista måltiden bör vara 12 timmar före studien);
  • det är nödvändigt att utesluta intag av mediciner inför analysen (om patienten tar antihistaminer (anti-allergiska) läkemedel, bör du rådfråga en läkare om hur mycket innan du börjar ELISA bör avbrytas);
  • Rök inte eller drick alkoholhaltiga drycker före undersökningen, som det kommer att påverka resultatet negativt;
  • du bör definitivt få tillräckligt med sömn innan analysen;
  • det är nödvändigt att utesluta all fysisk aktivitet, stressfaktorer;
  • diagnos av de flesta hormoner i det kvinnliga reproduktionssystemet kommer att kräva blodprovning på vissa dagar av menstruationscykeln.

Hur är

För att genomföra en enzymimmunanalys, tar patienten blod från ulnarven endast på tom mage. Patienten måste informera läkaren i förväg om förekomsten av sjukdomar och läkemedlen som tas så att resultaten av studien inte snedvrids. Som regel bör alla läkemedel sluta dricka 16 dagar före ELISA. Upplevelserna under proceduren liknar blodtagning under en biokemisk analys.

Materialet skickas till ett laboratorium där serumet i vilket antikropparna finns är isolerat från blodet. Den resulterande kompositionen placeras i ett provrör med antigener. Det kan vara en mängd allergener (mjölk, ull, pollen, citrusfrukter), patogener av virala och infektionssjukdomar och andra. Efter att ha fått reaktionen tappas alla vassle-rester. Med hjälp av specialindikatorer bestämmer specialister mängden antikroppar. Tidsramen för ELISA beror på laboratoriet. Som regel kan resultaten från studien ge under perioden från två dagar till en vecka.

IFA-dekryptering

En enzymbunden immunosorbentanalys hjälper till att bestämma närvaron av antikroppar i kroppen. Det finns flera klasser av immunglobuliner:

  1. IgM De allra första dyker upp efter infektion. Närvaron av dessa antikroppar indikerar sjukdomens utseende i alla fall eftersom en frisk person har inte denna klass. Vanligtvis är IgM-immunglobuliner närvarande i blodet under cirka 6 veckor.
  2. IgA Antikroppar finns i stora mängder i slemhinnorna och skyddar kroppen från penetrering av patogena mikrober. Om patienten har denna klass är det nödvändigt att bekämpa sjukdomen mer intensivt. Immunoglobuliner A uppstår ju bara vid kroniska sjukdomar. Försvinnandet av IgA indikerar förstörelsen av infektionen.
  3. IgG. Immunoglobuliner i denna klass indikerar att en person antingen är en smittbärare eller redan har lidit en sjukdom. Dessa antikroppar produceras efter IgM en månad efter infektion. Immunoglobuliner av klass G kan finnas i kroppen i 5-6 år, skydda den från ett återfall av sjukdomen, och med syfilis är sådana antikroppar livslånga.

Vid genomförande av en ELISA i barndomen (upp till 1,5 år) bör det komma ihåg att barnets blod innehåller IgG-antikroppar mot infektioner. Även om detta inte betyder att barnet är sjukt, är snarare detta faktum normen. Närvaron av klass M indikerar en intrauterin eller förvärvad infektion efter födseln, eftersom mödrar med IgM-antikroppar kan inte komma in i barnets kropp genom moderkakan. Tolkningen av möjliga kombinationer av närvaro eller frånvaro av antikroppar i klasser 3 presenteras i tabellen:

Vad är en enzymimmunanalys?

Med utvecklingen av modern medicin är det möjligt att utföra en mer djupgående diagnos vid misstankar om vissa patologier hos patienten. En av de informativa metoderna för laboratorieforskning var ELISA, som utförs med metoden för provtagning av venöst blod. För patienten förändras ingenting i sin helhet. Men ELISA-analysatorn utför en sofistikerad teknik för att studera det insamlade biomaterialet. I vad är IFA-analyserna och vad är finesserna för att använda ELISA-metoden som diagnostik förstår vi materialet nedan.

Vad är en enzymimmunanalys?

En enzymbunden immunosorbentanalys är en av metoderna för laboratoriediagnos, som baseras enbart på en reaktion som kallas "antigen-antikropp." Det är värt att förstå att ett antigen är en främmande proteinförening (molekyl) som har kommit in i människokroppen med en parasit, viral eller annan infektion. Det är helt enkelt en skadedjur. I sin tur är en antikropp en immuncell (immunoglobulin) som försvarar människokroppen när främmande molekyler upptäcks i den.

Antikroppar själva provoseras av antigenerna själva som har trängt in i människokroppen. När man går in i ”striden” för kroppens hälsa verkar antikroppar märka sig antigener, vilket är vad en laborant ser i blodprover. Det vill säga i det insamlade biomaterialet är det möjligt att spåra inte bara förekomsten av infektion, utan också dess spår efter att kroppen har återhämtat sig.

Vid utförande av en ELISA kan laboratorieassistenten se följande immunglobuliner för antigener:

  • Immunoglobuliner M (visas i resultaten som IgM). De vittnar om att den smittsamma processen i kroppen bara får sin styrka. Det vill säga, infektion har inträffat nyligen;
  • Immunoglobuliner G (visas som IgG). De bidrar till förstörelse av antigen några dagar efter införandet av infektion i människokroppen. Immunoglobuliner G kan finnas i patientens kropp under tillräckligt länge tid och bilda immunitet mot ett specifikt virus;
  • Immunoglobuliner E (visas som IgE). Ange parasitära infektioner i kroppen. Han talar också om atopiska reaktioner vid allergier. Det är värt att veta att analysen av ELISA ger ett resultat med en noggrannhet på 90% för parasitinfektioner;
  • Immunoglobuliner A (visas som IgA). Skydda patientens slemhinnor.

Genom att förskriva en enzymbunden immunosorbentanalys för en patient kan således den behandlande läkaren spåra infektionens varaktighet, graden av dess progression eller upptäcka närvaron av immunitet mot en viss infektion.

Diagnosprocessen för ELISA ser ut så här:

  • Det insamlade venösa blodet förs till blodserumstillståndet i laboratoriet;
  • Då använder laboratorieassistenten ett speciellt fack med celler, som alla har redan alla nödvändiga antigener. Det räcker att helt enkelt släppa blodserum i varje cell och spåra reaktionen av immunglobuliner (antikroppar) mot antigener. Närvaron av den "önskade" reaktionen framgår av en förändring i testmaterialets färg. Därefter studerar laboratorieassistenten testmediets optiska densitet.

I allmänhet hjälper en enzymbunden immunosorbentanalys för parasiter att identifiera sådana parasitiska patologier:

  • Ascaridos och enterobiasis (rundmaskar och pinmaskar);
  • trikinos,
  • Opisthorchiasis i akuta och kroniska former;
  • giardiasis;
  • amöbainfektion;
  • toxoplasmos;
  • Leishmaniasis i någon form.

Viktigt: enzymimmunanalys är både kvalitativ och kvantitativ. I det första fallet bekräftar eller avvisar laboratorieassistenten endast närvaron av det önskade ämnet i blodet. I det andra fallet indikerar analysen dess koncentration i patientens kropp.

Nackdelar med metoden

Med alla fördelarna med denna diagnosmetod är det värt att förstå att en enzymbunden immunosorbentanalys inte är ett sätt att hitta orsaken till en patients sjukdom, utan bara en metod för att bekräfta diagnosen som antas av den behandlande läkaren. Och med tanke på att forskning är ganska dyr måste den användas klokt. I detta fall bör resultaten av studien endast tolkas av en kvalificerad specialist.

Förberedelse för parasitanalys

Det är viktigt att förstå att identifiering av parasiter genom ett blodprov kräver viss förberedelse från patienten. Så innan du donerar blod måste du göra följande:

  • Dagen innan biomaterialet tas, bör feta livsmedel, alkohol och rökt mat uteslutas från kosten.
  • Blod för en enzymbunden immunosorbentanalys för parasiter och andra infektioner bör doneras på morgonen på tom mage;
  • Innan blod doneras är rökning förbjudet i minst 3-4 timmar;
  • På dagen för blodprovning rekommenderas att inte vara nervös och inte ta till ökad fysisk aktivitet.

Uppföljning av dessa regler hjälper till att undvika falska positiva resultat för antikroppar mot parasiter..

Avkryptering av resultaten

Efter att vi demonterat förkortningen ELISA och vad det är ─ kom vi på att det är värt att gå till tolkningen av resultaten. Det är viktigt att förstå här att om analysen utfördes kvalitativt kommer resultatet att vara positivt eller negativt. Det vill säga diagnosen bekräftar antingen läkarnas misstankar om en specifik diagnos eller vederläggar dem. I det här fallet kommer karaktärerna att vara "+" respektive "-".

Viktigt: ett negativt testresultat indikerar inte alltid att det inte finns infektion. Faktum är att antikroppar mot antigen kan bildas inom 14 dagar efter infektion och det är troligt att de ännu inte har bildats.

Om en kvantitativ analys genomförs, bestäms typen av antikroppar, deras mängd och aktivitetssteg. I synnerhet bestäms med en sådan diagnos IgG- och IgM-antikroppar (immunoglobuliner), vilka bildas vid olika perioder av infektionsprogression. De vanligaste resultaten i detta fall är:

  • Ökat IgM och fullständig frånvaro av IgG. Den här bilden indikerar en nyligen infektion och en akut fas av patologin..
  • Ökad aktivitet av båda typerna av immunglobuliner (IgM och IgG). Pratar om den långa och kroniska kursen för den smittsamma processen.
  • IgG-aktivitet och fullständig frånvaro av IgM. Infektionen var minst sex månader sedan och nu är viruset i ett utdraget kroniskt stadium.
  • Frånvaron av IgG- och IgA-antikroppar. Resultatet definieras inte..
  • Frånvaron av antikroppar IgM, IgA och IgG. Indikerar brist på immunitet mot en specifik infektion..
  • Aktiviteten hos antikroppar IgG, IgM och IgA indikerar en förvärring av den kroniska processen.

Förutom att identifiera antikroppstyperna anger laboratorieassistenten i en speciell kolumn på formuläret också deras antal i blodvolymen. Kom ihåg att ha tolkat resultaten själv när du har förstått vad ELISA-metoden är. Resultaten kan endast tolkas med noggrannhet av den behandlande läkaren, beroende på den föreslagna diagnosen, baserat på patientens kliniska bild..

Enzymimmunanalys med en uppdelning av indikatorer

Immun- och enzymatiska reaktioner

Som namnet antyder inkluderar ett IFA-blodprov flera komponenter, nämligen en immun- och enzymatisk reaktion.
En immunreaktion låter dig ansluta cellelement och patogener, medan en enzymatisk ger dig möjlighet att visualisera och utvärdera resultatet av en tidigare reaktion.

Överväg varje reaktion mer detaljerat..

Vad är immunsvar??

Immun är specifika reaktioner som gör att du kan binda ett antigen till en antikropp och skapa ett immunkomplex. Vad betyder det här? Först och främst är det nödvändigt att förstå att vilken cellyta som helst innehåller molekyler som innehåller data om cellen, kallad antigen och uppdelad i:

Enskilda antigener har, trots vissa likheter, många skillnader. De finns i en viss organisme och upprepas aldrig i andra. Artenantigener finns i organismerna av olika typer av levande saker. Så, till exempel, apor, hästar eller hundar har sina egna, till skillnad från något antigen. Det är därför antigen av denna typ används av immunsystemet för att känna igen sina egna och främmande celler, vilket faktiskt är grunden för enzymet immunanalys.

Hur känns igen antigen? Allt är klart nog här. Enkelt uttryckt fångar en immuncell en cell som har orsakat den att "misstänka" och jämför dess antigen med beskrivningen i åtanke. Om antigenen i den tvivelaktiga cellen motsvarar den, "frigör" immuncellen den och fortsätter. Om beskrivningen är annorlunda, är organismens svar på hotet en - förstörelse. Dessutom är erkännandet av "fienden" i detta fall nästan 100%.

Immunoanalys av sandwich-typ

Fikon. 2. Schematisk framställning av immunoassay-typen "sandwich". ATP är en antikropp på ett substrat, ATd är en detekteringsantikropp, AH är en antigen, M är en etikett kovalent kopplad till en detekteringsantikropp, P är ett substrat på vilket antikroppen på substratet adsorberas.

I denna variant av immunoanalys (fig. 2) används ett par antikroppar specifika för rumsligt avlägsna epitoper av det studerade antigenet.

I. Adsorption av substratantikroppar

I brunnarna på en 96-brunns immunoassay-platta sorberas substratantikroppar med 1-2 μg per brunn i 100 μl fosfatbuffrad saltlösning (PBS). Inkubation utförs i 30 minuter vid rumstemperatur och skakas på en horisontell tablettskakare. Tvättning (tvåfaldig) av obundna antigenmolekyler utförs med fosfatbuffrad saltlösning innehållande 0,1% Tween-20 (PBST).

II. Låsa

För att blockera icke-specifika bindningsställen fylls plattbrunnar med PBST och inkuberas under 10-15 minuter vid rumstemperatur.

III. Antigeninkubation

50 ul av testlösningen eller standardutspädningar av antigen sättes till brunnarna i den förförsorberade antikroppsplattan. Antigenutspädningar bör beredas på basis av PBST, eftersom Tween-20 reducerar den ospecifika bindningen av proteinmolekyler till varandra och till tabletten. Både testlösningen och standardutspädningar av antigenet införs i par (eller 3 replikat) med användning av två (tre) brunnar för varje proteinutspädning. Inkubation utförs vid rumstemperatur under 30 minuter under konstant omröring. Tvättning utförs med PBST-lösning 3 gånger.

IV. Inkubation av enzymmärkta antikroppar

100 ul av en lösning av specifika antikroppar konjugerade med en enzymmarkör tillsätts till plattans brunnar. Den optimala koncentrationen av konjugerade antikroppar indikeras vanligtvis av tillverkaren (använd vanligtvis en koncentration av 2-4 μg / ml). Inkubation med antikroppar innehållande enzymetiketten utförs under 30 minuter vid rumstemperatur och skakas på en horisontell plattskakare. Tvättning utförs med PBST 5-6 gånger.

V. Genomföra en enzymatisk reaktion åtföljd av utseendet på en färgad produkt

100 ul substratlösning sättes till brunnarna och inkuberas under 10 minuter vid rumstemperatur under konstant omrörning..

VI. Stoppa den enzymatiska reaktionen

Innan mätning av den optiska densiteten stoppas en färgreaktion med användning av 0,5 M H24. Efter inkubation tillsättes 50 ul av en lösning av 0,5 M svavelsyra till brunnarna med en arbetslösning av RPD. Efter det kan du omedelbart börja mäta den optiska densiteten.

VII. Absorbansmätning

Den optiska densiteten för lösningen av den färgade produkten mäts vid X = 490 nm med användning av en tablettspektrofotometer.

tryckversion

Mer om immunoglobuliner

Totalt producerar den mänskliga kroppen 5 kända klasser av antikroppar, som betecknas Ig (som står för immunoglobuliner), som tillhör klasserna A, M, G, E och D. Alla av dem är av stor vikt vid tolkningen av resultaten från ELISA. Naturligtvis finns det mycket mer komplex, och inte alla är fortfarande öppna. Men vid diagnosen olika sjukdomar är de första tre typerna av antikroppar mest värdefulla. Ett ELISA-blodprov använder maximalt information: ögonblicket för antikroppar i blodet, förändringen i deras koncentration beroende på tid, försvinnningsperioden, och typen av specifik antikropp.

Deltagare i den primära, akuta infektionsprocessen är alltså immunglobuliner av klass M, som alltid indikerar en akut fas, även när sjukdomen raderas kliniskt. Ett typiskt exempel är den anterteriska formen av akut viral hepatit B eller C. En enzymbunden immunosorbentanalys för hepatit kommer att visa att en person har akut hepatit, och symtom som hypokondri, munnorrhet, värkande leder och andra icke-specifika symtom är lätt att förstå.

Efter flera veckor hittas dessa antikroppar i en alltmer försvinnande koncentration, vilket ger immunglobuliner av klass G. De upptäcks i blodet i månader, till och med år, och indikerar endera återhämtning och kan sedan stanna kvar i livet och bilda en stark immunitet. Detta indikerar ett kraftfullt försvar mot patogenantigener. Så det är antikropparna i denna klass som gör en person immun mot upprepade fall av miltbrand och pest. Men det finns tillfällen då dessa antikroppar inte stör antigenens skadliga effekter. I det här fallet kan vi prata om att öka aktiviteten i den kroniska processen.

Vad gäller IgE har den tillämpningar för diagnos av olika parasitiska infektioner och allergiska tillstånd, och IgD har en extrafunktion: den enzymbundna immunosorbentanalysen gör att du kan använda den vid den omfattande diagnosen bronkialastma och autoimmuna tillstånd. Naturligtvis är det mycket mer komplicerat att dechiffrera ELISA-analysen, och immunologer kan berätta mycket mer. Vilka är indikationerna på att patienten självständigt kan gå till laboratoriet för att utföra studier?

Hur analyserar ELISA

Under villkoren för utrustade laboratorier och medicinska centra kan treponemal bestämning med enzymimmunoanalysen utföras med flera metoder, som kallas direkt och indirekt. Men basen för dessa reaktioner är ett sätt som gör att du kan analysera för syfilis av ELISA. Detta test utförs på ett visst sätt..

Laboratoriets läkare har en speciell tablett - en panel med hål i form av runda hålrum i mängden upp till hundra. De speciellt framställda koncentrerade syfilisantigenerna används också i satser för denna analys, som placeras i ELISA-plattans brunnar. Efter att ha tagit patientens blod på morgonen på tom mage separeras serum från blodet och placeras i brunnar med antigener. Antigen-antikroppsbindningsreaktion uppträder i brunnar.

ELISA för syfilis är baserad på reaktionen på bindning av immunföreningarna i det första steget och konjugat med en speciell enzymmarkör, som krävs för att läsa reaktionens kvalitet. I detta skede införs förutom enzymatiskt peroxidas, kromogena färgämnen för att färga materialet beroende på resultatet av reaktionen.

Baserat på de framträdda färgade hålen i surfplattan dekrypteras testet. I uppsättningar av olika ELISA-metoder bifogas tabeller över färgscheman, som bestämmer mängden, nivån av immunglobuliner, antikroppar från patientens serum i en enhetsvolym.

För att utvärdera resultatet av reaktionen används också specialutrustning - en spektrofotometer för fotometri och uppskattning av materialets densitet i brunnarna jämfört med kontrollprover. Baserat på densiteten erhålls ett resultat som är klart fastställt för varje orsakande syfilismedel inom gränserna för normer och patologi.

allmän information

En enzymbunden immunosorbentanalys kan användas för att bestämma nivån av hormoner, immunoglobuliner, immunologiska komplex såväl som ett antal biologiskt aktiva substanser. Som ett material för en sådan studie kan du donera blod, cerebrospinalvätska, innehållet i glaskroppen etc..

En enzymbunden immunosorbentanalys har nyligen använts alltmer på grund av ett antal fördelar:

  • känslighet över 90 procent;
  • stabil lagring av ingredienser som behövs för hållning;
  • snabb och enkel diagnostik;
  • minimikostnader för material;
  • automatiserad process;
  • låg kostnad.

Dessutom låter ELISA identifiera infektioner, inklusive hepatit, i ett tidigt skede. Det är därför det ibland rekommenderas istället för PCR-studier, samt under graviditet. Men det gör inte utan nackdelar. Resultaten av sådana tester kommer bara att prata om kroppens svar på patogenen, men det kommer inte att fastställas. I de flesta fall rekommenderas en kombination av ELISA och PCR..

Med hjälp av IFA-testning kan du ta reda på resultaten från en hel uppsättning. I synnerhet bestäms normen för sköldkörtelhormoner, närvaron av tumörmarkörer och ett antal infektioner. Normen väljs separat för varje indikator. Så för vuxna bör ELISA normalt visa TG-värden inom 70 IE / ml, T4 i området 64 till 146 nmol / L, T3 beräknas i mängden 1,8-2,8 nmol / L.

Vid planering av en graviditet kan sådana tester göras för att bestämma könshormoner. I synnerhet luteinisering. Dess värden kommer att variera beroende på cykeldagen. I synnerhet är det maximala värdet som kan observeras 150 och det minsta 1 mU / L.

När ELISA används för att bestämma könshormonet hos män, är en siffra i intervallet 0,5 till 10 mU / L en normal indikator. Om kronisk gonadotropin undersöks kommer resultaten att variera beroende på kön. Speciellt för vuxna män och kvinnor i frånvaro av graviditet bör indikatorn vara inom 5 mU / ml. Om testning utförs under graviditeten kan resultaten vara olika beroende på trimestern upp till tiotusentals enheter.

Vad är klamydia

PCR, liksom ELISA, används ofta i moderna laboratorier för diagnos av sexuellt överförda sjukdomar. Samtidigt föreslår läkare ofta att utföra båda testerna. Många patienter tror att detta är en extra pengar, men dessa test har en allvarlig skillnad, även om de vid första anblicken kan verka identiska. En klassificering av psykologiska forskningsmetoder kan dock till viss del tillämpas.

Resultaten av PCR och ELISA används ofta under graviditet, när det är nödvändigt att utesluta klamydial infektion. Ofta är ett så positivt resultat för infektionen ett svar på frågan om män och kvinnor, "Varför kan jag inte bli gravid". Förutom risken för infertilitet utgör klamydia under graviditeten en risk för infektion hos barnet.

Det huvudsakliga problemet för diagnos av en sådan infektion är den asymptomatiska kursen. Emellertid kan specifika antikroppar detekteras tio dagar efter infektion. Om ett PCR-test under graviditeten visar på förekomsten eller frånvaron av sådana patogener, kommer ELISA att berätta vilket steg processen är nu

En sådan studie är också viktig för att utvärdera resultaten av terapi.

Avkodningsanalys

En analys av hepatit eller någon annan patogen i ELISA-prestanda väcker ofta frågor. Särskilt hur dekrypteringen genomförs. För tillfället indikerar resultaten ett av fem immunoglobuliner: IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. Det är de som sticker ut, eftersom de andras roll inte har klargjorts till slut. De viktigaste för studien är klasserna A, M och G.

Immunoglobulin A är huvudsakligen ansvarig för skyddande funktioner i slemhinnorna. Resultatet av deras närvaro kommer att vara negativt om sjukdomen identifieras i sin akuta form i början. Utseendet på sådana skyddsmarkörer förekommer vanligtvis två veckor efter sjukdomens början. Ibland erhålls ett positivt resultat även senare.

Huvudfunktionen för dessa antikroppar är detektion och förstörelse av mikroorganismer. Deras antal minskas alltid om sjukdomen avtar. Vanligtvis, efter åtta veckor från sjukdomens början, kommer ett positivt resultat att vara frånvarande. Detektion av immunglobuliner i klass A vid ett senare datum kan indikera en process som flyter in i en kronisk.

De viktigaste markörerna, vars avkodning hjälper till att bestämma den akuta fasen i patologin, är immunglobuliner av klass M. De kan upptäckas i blodet fem dagar efter infektion. De försenas i blodet i cirka sex veckor, varefter deras försvinnande inträffar snabbt.

Immunoglobuliner av klass G är ansvariga för bildandet av en kvarvarande immuneffekt. Cirka en månad efter infektion börjar de upptäckas i blodet. I framtiden sträcker sig deras definition under många månader. Ofta kan du observera dem hela ditt liv. Sådana immunoglobuliner bildas som en skyddande reaktion, vilket eliminerar re-infektion. Exempelvis bildas sådana immunglobuliner i blodet hos en person som hade vattkoppor under barndomen och följaktligen fick immunitet till slutet av livet. Naturligtvis finns det andra infektioner vars återkomst är möjlig. I detta fall kommer analysen att detektera återväxt av denna grupp immunglobuliner.

Immunoglobuliner E används för att upptäcka parasiter i kroppen. Immunoglobulinet som tillhör grupp D är beläget i B-lymfocyter och finns i vissa mängder hos friska människor. Vid ungefär tio års ålder når de sina maximala värden. Mängden sådant immunglobulin ökar under graviditeten. Dessutom kan närvaron av det i en större mängd än vanligt vara ett tecken på bronkialastma, ett immunbristillstånd.

dekryptering

Antikroppar, de är också immunoglobuliner, är indelade i fem klasser, men vanligtvis bestäms endast tre av dem: M, G och A, som ackumuleras i kroppen under olika perioder efter infektion.

Immunoglobuliner M visas först, de är IgM. De uppstår från 4-5 dagar efter infektion och är i blodet i en och en halv månad, varefter de försvinner. Om ELISA visar sin närvaro har vi att göra med en akut period av sjukdomen eller dess förvärring.

På tre till fyra veckor inträffar IgG, det vill säga immunglobuliner av klass G. De kan vara närvarande i flera månader eller till och med år i rad. Om ELISA utfördes två gånger med ett intervall på två veckor, och mängden IgG i båda proverna ökades, kan vi prata om infektion eller re-infektion med den.

IgA, det vill säga antikroppar av klass A upptäcks efter en förvärring av infektionen eller en månad efter dess uppträdande i kroppen. De flesta av dem cirkulerar i våra slemhinnor och endast en femtedel i blodet. De försvinner först efter att alla smittämnen förstörts, det vill säga minst två veckor efter infektionen, högst åtta.

Om analysen av ELISA efter botemedel visar sin närvaro har sjukdomen gått in i det kroniska stadiet.

När dekryptering utförs måste du också vara uppmärksam på skylten + och - i formen. Endast en läkare kan fatta en fullständig dom, men vissa funktioner i kroppen kan bedömas på grundval av följande uppgifter:

Endast en läkare kan fatta en fullständig dom, men vissa funktioner i kroppen kan bedömas på grundval av följande uppgifter:

  • Brist på immunitet mot infektioner indikeras av en sådan kombination av indikatorer som JgM, JgG, JgA med ett minus överallt;
  • Närvaron av immunitet efter ett vaccin eller en infektion indikeras av JgM och JgA med ett minustecken och JgG med ett plustecken (JgG (+));
  • Följande indikatorer kan berätta om förekomsten av akut infektion: JgA (- / +), JgG (- / +) och JgM (+);
  • Vid förvärring av kroniska infektioner kommer formuläret att innehålla följande notering: JgM, JgG och JgA med pluss överallt;
  • Vid kroniska infektioner observeras följande bild: JgG (+/-), JgM (-) och JgA (+/-);
  • JgM (-) indikerar återhämtning.

En studie såsom en enzymbunden immunosorbentanalys av blodserum utförs också ofta. Det behövs för studier av sköldkörtelhormoner. Indikatorerna för sådana hormoner som tyroxin, fritt tyroxin, triiodotyronin, fritt triiodotyronin och tyroglobulin är viktiga här.

Dessutom är en sådan studie användbar för diagnos av infektionssjukdomar och autoimmuna sjukdomar..

Enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA, ELISA). Kärnan, metodens princip och studiens stadier. Analys för antikroppar, klasser av antikroppar, immunkomplex.

I samband med utvecklingen av cellteknologier, molekylärbiologi, genetik, fysik, kemi och ett antal andra högteknologiska discipliner införs nya högprecisions- och högteknologiska metoder i vardagen. Dessa tvärvetenskapliga trender påverkar både området medicinsk kunskap och relaterade områden av biologiska, biokemiska problem. Under de senaste tio åren har en metod för klinisk laboratoriediagnostik som kallas enzymimmunoanalys blivit utbredd och införts i masspraxis..

I allmänhet har teknologier för immunologiska enzymatiska och radiologiska reaktioner använts i stor utsträckning för att skriva celler, cellkulturer, olika vävnader sedan början av 80-talet av XX-talet. Dessa metoder var emellertid mycket tidskrävande, inte enhetliga, inte standardiserade, vilket utesluter deras användning i terapeutiska och diagnostiska syften i hopkall. Endast smala, högteknologiska och högspecialiserade laboratorier använde dessa metoder..

Men med utvecklingen av teknik, mikroteknologi och produktion av olika biopolymermaterial blev det möjligt att producera färdiga uppsättningar av enzymimmunoanalysdiagnostik, som kan användas av laboratorier för medicinska institutioner med en bred profil. ELISA används ofta för att diagnostisera alla typer av infektioner (klamydia, syfilis, cytomegalovirus, toxoplasmos, herpes, etc.), både akuta och kroniska, såväl som latenta former som förekommer utan kliniska symptom. Denna metod används också för att kontrollera kroniska sjukdomar. Låt oss försöka ta reda på vad den här metoden är och vilka principer som ligger till grund för den.?

Enzymbundna immunosorbentanalyskomponenter - immunsvar och enzymatisk reaktion

Vad är ett immunsvar? Vad är en antikropp, antigen?

Vad är ett immunsvar? Vad är antigen??
Först av allt kommer vi att analysera vad immunreaktioner är. Immunreaktioner är specifika reaktioner för bindning av ett antigen till en antikropp för att bilda ett immunkomplex. Vad betyder det? På ytan på varje cell i vilken organisme som helst, finns det speciella strukturer som kallas antigener. Antigener i allmänhet är molekyler som innehåller information om en cell (liknande information om en persons märke, vilket indikerar grunddata från den personen).

Individuella och arter antigener - vad är det? Varför behövs dessa antigener??

Det finns enskilda antigener, det vill säga bara inneboende för denna speciella organisme. Dessa individuella antigener är olika för alla människor, det liknar varandra, men fortfarande olika. Två identiska kopior av enskilda antigener finns inte i naturen!

Den andra huvudtypen av antigener är artantigener, det vill säga inneboende i en viss typ av levande varelse. Till exempel har en person sitt eget artantigen som är gemensamt för alla människor, möss har sina egna musarterantigen, etc. På ytan av varje cell är ett specifikt och individuellt antigen nödvändigtvis närvarande.

Arten antigen används av celler i immunsystemet för att identifiera "vän eller fiende".

Hur antigenigenkänning sker?

En immuncell binder till en misstänkt cell och identifierar en individuell antigen. I immuncells minne är det "inspelat" hur "dess antigen" ser ut. Om antigenen i en misstänkt cell sammanfaller med beskrivningen av "dess antigen" utgör inte denna cell av sin egen organisme en fara. Sedan "förband immuncellen" och lämnar. Och om antigenet inte sammanfaller med beskrivningen av "vår", identifierar immuncellen denna cell som "främmande", vilket betyder att den är potentiellt farlig för hela organismen. I det här fallet "lossar inte immuncellen" utan börjar förstöra det farliga föremålet. Noggrannheten hos sådant immunologiskt erkännande är fantastiskt - 99,97%. Det finns praktiskt taget inga fel!

Vad är en antikropp, immunkomplex?
Och vad är en antikropp?

En antikropp är en speciell molekyl som ligger på ytan av en immuncell. Det är antikroppen som binder till antigenerna i den misstänkta cellen. Vidare överför antikroppen information till cellen där igenkänningen sker och mottar en retursignal för två typer av "egen" eller "främmande". När signalen "egen" antikropp förstör anslutningen med antigenet och frigör cellen.

Vad är immunkomplexet?
När signalen är "främmande" utvecklas situationen annorlunda. Antikroppen bryter inte förbindelsen med antigenet utan snarare skickar specifika signaler "förstärkning". Biologiskt betyder detta att andra antikroppar som finns i en annan del av cellen börjar flytta till det område där farosignalen kommer från, och också bildar en koppling mellan sig själva och det fångade antigenet. I slutändan verkar antigenet vara omgivet på alla sidor och fast bundet. Ett sådant antigen + antikroppskomplex kallas immunkomplexet. Från detta ögonblick börjar antigenanvändning. Men nu är vi inte intresserade av detaljerna om antigenneutraliseringsprocessen..

Typer av antikroppar (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Antikroppar är proteinstrukturer som följaktligen har ett kemiskt namn, som används som synonym för ordet antikroppar. Så antikroppar = immunglobuliner.

Det finns 5 typer av immunglobuliner (Ig) som binder till olika typer av antigen på olika platser i människokroppen (till exempel på huden, på slemhinnorna, i blodet etc.). Det vill säga antikroppar har en arbetsdelning. Dessa immunoglobuliner kallas bokstäver i det latinska alfabetet - A, M, G, D, E och betecknas på följande sätt - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

Vid diagnos används endast en typ av antikropp, som är den mest specifika med avseende på mikroben som bestäms. Det vill säga, bindningen av denna typ av antikropp till det detekterade antigenet sker alltid. Vanligtvis används IgG och IgM.

Det är denna princip om immunresponsen (den unika noggrannheten och specificiteten för igenkänning av ett definierat biologiskt objekt) som ligger till grund för enzymimmunanalysen. På grund av antikropparnas höga noggrannhet i igenkänningen av antigener, är noggrannheten för hela enzymimmunoanalysen också den högsta..

Enzymatisk reaktion

Vad är en enzymatisk reaktion? Vad är affinitet, substrat och reaktionsprodukt?
Vi fortsätter att överväga den enzymatiska reaktionen i metoden för enzymimmunanalys.

Vad är en enzymatisk reaktion?

En enzymatisk reaktion är en kemisk reaktion där en substans omvandlas till en annan genom verkan av ett enzym. Det ämne som enzymet verkar på kallas ett substrat. Och ämnet som erhålls som ett resultat av enzymets verkan kallas reaktionsprodukten. Dessutom är det speciella med den enzymatiska reaktionen sådan att ett visst enzym endast verkar på ett visst substrat. Denna egenskap hos ett enzym för att känna igen ”dess” substrat kallas affinitet..

Således utför varje enzym endast en reaktion som är specifik för den. Många enzymer är kända i den biologiska världen såväl som enzymatiska reaktioner. Vid enzymimmunanalys används endast ett fåtal enzymatiska reaktioner - högst 10. Samtidigt valdes enzymatiska reaktioner vars produkt är färgade ämnen. Varför ska produkterna från den enzymatiska reaktionen färgas? För att beräkna koncentrationen av ett ämne från en färgad lösning finns det en enkel kemisk metod - kolorimetri.

Colorimetry-metod - essensen och principen

Colorimetry använder en mätning av färgtätheten för en lösning, och koncentrationen av ett ämne beräknas utifrån färgtätheten. Vid kolorimetri är två varianter av beroende av färgdensitet av koncentrationen av ett ämne möjliga - detta är ett direkt proportionellt beroende eller omvänt proportionellt beroende. Med ett direkt proportionellt beroende, desto högre koncentration av ämnet, desto intensivare är färgtätheten för lösningen. När det är omvänt proportionellt, desto högre koncentration av ämnet, desto lägre är tätheten för färgens färg. Tekniskt händer detta enligt följande: flera lösningar med en känd koncentration av ett ämne tas, dessa lösningers densitet mäts, en graf över koncentrationen kontra färgdensitet konstrueras (kalibreringsgraf).

Mät sedan färgtätheten på lösningen, vars koncentration bestäms, och från kalibreringsgrafen hittar du koncentrationsvärdet som motsvarar nivån på den uppmätta densiteten för lösningens färg. I moderna automatiska färgmätare kalibrerar de bara en gång, sedan konstruerar enheten själv en kalibreringskurva som finns kvar i enhetens minne och mätningen händer automatiskt.

I enzymimmunoanalysen används följande enzymer oftast: peroxidas, alkaliskt fosfatas, avidin.

Hur kombineras immunologiska och enzymatiska reaktioner i en enzymimmunoanalys? Nu kommer vi att undersöka själva enzymbunden immunosorbentanalys. Vilka stadier inkluderar det och vad händer under dessa reaktioner? Enzymbunden immunosorbentanalys är direkt och indirekt.

Enzymbunden immunosorbentanalys - stadier

I en direkt enzymbunden immunosorbentanalys används antikroppar mot ett detekterbart antigen kopplat till en specifik märkning. Denna specifika etikett är substratet för den enzymatiska reaktionen..

Fästningen av antigener till hålets yta och anslutningen av antigen med antikropp

Hur utförs direkt enzymimmunanalys? Biologiskt material tas (blod, skrapningar från slemhinnor, utstryk) och placeras i speciella hål. Biologiskt material lämnas i brunnarna i 15-30 minuter så att antigenerna kan fästa vid ytan på brunnarna. Därefter tillsätts antikroppar mot det detekterbara antigenet till dessa brunnar. Detta innebär att vid detektering av antigener, till exempel syfilis, tillsätts antikroppar mot syfilisantigener. Dessa antikroppar erhålls industriellt och laboratorier köper färdiga satser. Denna blandning av testmaterialet och antikropparna lämnas under en tid (från 30 minuter till 4-5 timmar) så att antikropparna kan hitta och kontakta sitt ”egna” antigen. ett prov av antigener, desto fler antikroppar kommer att kontakta dem.

Borttagning av "överskott" antikroppar

Såsom indikerats är antikroppar också associerade med en specifik märkning. Eftersom antikroppar tillsätts i överflöd kommer inte alla att binda till antigen, och om det inte finns något antigen i provet, kommer följaktligen ingen antikropp att binda till det önskade antigenet. För att avlägsna de "extra" antikropparna hälls innehållet i brunnarna helt enkelt. Som ett resultat av detta avlägsnas alla "extra" antikroppar, och de som binder till antigenen kvarstår, eftersom antigenen "limmas" på ytan av brunnarna. Brunnarna sköljs flera gånger med en speciell lösning som låter dig tvätta alla "extra" antikroppar.

Enzymatisk reaktion - bildning av en färgad förening

Därefter börjar det andra steget - en enzymatisk reaktion. En enzymlösning tillsättes till de tvättade brunnarna och lämnas i 30-60 minuter. Detta enzym har en affinitet för substansen (specifik märkning) till vilken antikropparna är bundna. Enzymet genomför en reaktion, varför denna specifika etikett (substrat) förvandlas till en färgad substans (produkt). Därefter bestäms koncentrationen av denna färgade substans med kolorimetri. Eftersom denna specifika etikett är associerad med antikroppar, betyder det att koncentrationen av den färgade reaktionsprodukten är lika med antikropparnas koncentration. Och koncentrationen av antikroppar är lika med antigenkoncentrationen. Således, som ett resultat av analysen, får vi svaret, vad är koncentrationen av den detekterade mikrob eller hormon.

Så här sker direkt enzymimmunoanalys. Imidlertid används indirekt enzymbunden immunosorbentanalys ofta idag, eftersom känsligheten och noggrannheten för indirekt är högre än direkt. Så låt oss gå vidare till en indirekt enzymbunden immunosorbentanalys.

Indirekt enzymimmunanalys - stadier av

Indirekt enzymimmunanalys har två steg. I det första steget används omärkta antikroppar mot detekterbara antigen, och i det andra steget används märkta antikroppar mot de första omärkta antikropparna. Det vill säga, det visar sig inte vara direktbindning av antikroppen till antigenet, utan en dubbel kontroll: bindningen av antikroppar till antigenet, varefter de andra antikropparna binder till antikroppen + antigenkomplexet. Som regel är antikroppar för det första steget murina och för det andra getter.

Fixering av antigener på ytan av brunnen och bindning av antigen till omärkt antikropp
Såväl som för direkt enzymimmunoanalys utförs en provtagning av biologiskt material - blod, skrapningar, utstryk. Det studerade biologiska materialet införs i brunnarna och lämnas i 15-30 minuter för att vidhäfta antigen till ytorna på brunnarna. Sedan läggs omärkta antikroppar mot antigen till brunnarna och lämnas under en tid (1-5 timmar) så att antikropparna binder till "sina" antigener och bildar ett immunkomplex (första steget). Ta sedan bort de "extra", inte bundna antikropparna, genom att hälla innehållet i hålen. Skölj med en speciell lösning för att helt ta bort alla obundna antikroppar.

Bindningen av märkta antikroppar till den komplexa antigen + omärkta antikroppen
Sedan tar de de andra antikropparna - märkta, läggs till brunnarna och lämnar igen under en tid - 15-30 minuter (andra steget). Under denna tid binds märkta antikroppar till den första - inte märkta och bildar en komplex - antikropp + antikropp + antigen. Emellertid tillsätts både märkta och omärkta antikroppar till överskottsbrunnarna. Därför är det återigen nödvändigt att ta bort de "extra", redan märkta antikropparna som inte binder till omärkta antikroppar. För att göra detta, upprepa proceduren för att hälla innehållet i hålen och tvätta med en speciell lösning.

Enzymatisk reaktion - bildning av en färgad förening
Därefter introduceras ett enzym som genomför reaktionen genom att konvertera "etiketten" till en färgad substans. Färgning utvecklas inom 5-30 minuter. Därefter genomförs kolorimetri och koncentrationen av det färgade ämnet beräknas. Eftersom koncentrationen av den färgade substansen är lika med koncentrationen av märkta antikroppar, och koncentrationen av märkt är lika med koncentrationen av omärkta antikroppar, som i sin tur är lika med antigenkoncentrationen. Således erhåller vi koncentrationen av detekterbart antigen.
En sådan dubbel kontroll i form av användning av två typer av antikroppar gjorde det möjligt att öka känsligheten och specificiteten för den enzymbundna immunosorbentanalysen. Trots förlängningen av analystiden och införandet av ytterligare steg kompenseras dessa förluster av resultatets noggrannhet. Det är därför för närvarande den stora majoriteten av enzymimmunoanalysmetoder är indirekt enzymimmunoanalys.


Vilka sjukdomar upptäcks genom enzymimmunanalys?

Vi fortsätter att överväga vilka sjukdomar och vilka biologiskt aktiva substanser som upptäcks genom enzymbunden immunosorbentanalys. Ämnen detekterade med enzymimmunanalys presenteras i tabellen.

ELISA: vad är det? varför behövs det? för- och nackdelar med metoden

ELISA - vad är det? Det fullständiga namnet på denna diagnostiska metod kallas en enzymbunden immunosorbentanalys, och den är baserad på bestämning i perifert blod av antikroppar från olika klasser, eller immunoglobuliner, som människokroppen producerar.

I praktiken av en läkare tar ELISA-analys en mycket viktig plats när det är nödvändigt att diagnostisera all smittsam patologi. Denna analys visar inte bara faktumet på förekomsten av en infektionssjukdom, utan också stadiet i den patologiska processen. ELISA-metoden indikeras inte bara i förhållande till patogenen: den används för att diagnostisera allergiska tillstånd. Detta test låter dig identifiera problem i immunsystemet, med många sjukdomar i det hematopoietiska systemet, autoimmuna och andra störningar.

Varför behöver jag en IFA??

Alla forskare är benägna att tro att namnet "antikropp" väljs för dåligt. Men ändå återspeglar det en viktig egenskap hos immunoglobuliner: de kan binda och neutralisera skadliga ämnen, närmar sig dem som en "nyckel" till ett "lås". Mängden antikroppar i blodet återspeglar inte bara kroppens allmänna förmåga att skydda mot infektioner, utan också förmågan att bilda cirkulerande immunkomplex som kan uppstå vid olika autoimmuna sjukdomar, till exempel med reumatoid artrit eller ankyloserande spondylit..

Antikroppskomplex med ett antigen (en skadlig faktor av smittsam karaktär) är resultatet av organismens svar på införandet av "utomstående". Därför lär sig immunsystemet att känna igen dem, med hjälp av lymfocyter tränar det immunkompetenta celler, och de kan producera mycket specifika antikroppar. Så antikroppar mot Epstein-virus ordnas annorlunda än antikroppar mot viral hepatit C, eller mot Escherichia coli, och anti-HAV, eller antikroppar mot hepatit A-virus - annorlunda än autoantikroppar mot brosk. Det är den höga specificiteten och korrespondensen mellan immunglobuliner och en infektiös patogen som gör en laboratorieundersökning såsom en enzymimmunoanalys mycket värdefull.

Efter en stark koppling av antikroppar och antigen till ett enda komplex (antigen-antikropp) förlorar skadliga faktorer sin förmåga att skada kroppsvävnader, och sedan neutraliseras eller lyseras dessa komplex antingen med fagocytos av neutrofiler, och "digereras", lämnar kroppen.

Ett ELISA-blodprov kan visa vilken specifik patogen faktor vår kropp står inför, i vilket skede är kroppens interaktion med infektionen. Efter studien kan läkaren göra en prognos med hög grad av förtroende, föreskriva vissa typer av behandling och i vissa fall till och med bestämma patientens livslängd, särskilt i fall av kroniska virusinfektioner, till exempel med viral hepatit C.

Men i vissa fall finns det inga smittämnen i kroppen alls, och antikroppar av misstag "attackerar" sina egna organ och vävnader, eftersom immunkompetenta celler fick falsk information. Sådana sjukdomar kallas autoimmun, och en enzymbunden immunosorbentanalys hjälper också till att känna igen denna kroniska patologi och hjälpa till att diagnostisera.

Mer om immunoglobuliner

Totalt producerar den mänskliga kroppen 5 kända klasser av antikroppar, som betecknas Ig (som står för immunoglobuliner), som tillhör klasserna A, M, G, E och D. Alla av dem är av stor vikt vid tolkningen av resultaten från ELISA. Naturligtvis finns det mycket mer komplex, och inte alla är fortfarande öppna. Men vid diagnosen olika sjukdomar är de första tre typerna av antikroppar mest värdefulla. Ett ELISA-blodprov använder maximalt information: ögonblicket för antikroppar i blodet, förändringen i deras koncentration beroende på tid, försvinnningsperioden, och typen av specifik antikropp.

Deltagare i den primära, akuta infektionsprocessen är alltså immunglobuliner av klass M, som alltid indikerar en akut fas, även när sjukdomen raderas kliniskt. Ett typiskt exempel är den anterteriska formen av akut viral hepatit B eller C. En enzymbunden immunosorbentanalys för hepatit kommer att visa att en person har akut hepatit, och symtom som hypokondri, munnorrhet, värkande leder och andra icke-specifika symtom är lätt att förstå.

Efter flera veckor hittas dessa antikroppar i en alltmer försvinnande koncentration, vilket ger immunglobuliner av klass G. De upptäcks i blodet i månader, till och med år, och indikerar endera återhämtning och kan sedan stanna kvar i livet och bilda en stark immunitet. Detta indikerar ett kraftfullt försvar mot patogenantigener. Så det är antikropparna i denna klass som gör en person immun mot upprepade fall av miltbrand och pest. Men det finns tillfällen då dessa antikroppar inte stör antigenens skadliga effekter. I det här fallet kan vi prata om att öka aktiviteten i den kroniska processen.

Vad gäller IgE har den tillämpningar för diagnos av olika parasitiska infektioner och allergiska tillstånd, och IgD har en extrafunktion: den enzymbundna immunosorbentanalysen gör att du kan använda den vid den omfattande diagnosen bronkialastma och autoimmuna tillstånd. Naturligtvis är det mycket mer komplicerat att dechiffrera ELISA-analysen, och immunologer kan berätta mycket mer. Vilka är indikationerna på att patienten självständigt kan gå till laboratoriet för att utföra studier?

Indikationer för analys

Först av allt måste du förstå att det inte finns någon sådan analys - "bara blod på ELISA." Det finns en analys för hepatit, ibland för ureaplasma eller syfilis. Således kan donera blod för ELISA endast riktas, "beställa" sökandet efter den önskade infektionen. Det är bara så obegripligt varför man donerar blod från en blodåre och inte vet vad man ska leta efter. Det är därför den enzymbundna immunosorbentanalysen är ett kraftfullt verktyg som är viktigt i den diagnostiska sökningen. Endast en läkare kan förskriva denna analys, eftersom han medvetet söker efter en infektion som kännetecknas av dessa symtom. En vanlig person kan naturligtvis beställa 150 blodprover med ELISA för "alla infektioner", men detta kommer att vara ett orimligt och kostsamt tillvägagångssätt för diagnos, genom att testa allt.

Det mest populära är syftet med dessa tester för följande sjukdomar och tillstånd:

Olika mikrobiella och virala infektioner, symtom på infektionssjukdomar - utslag, feber, gulsot, svullna lymfkörtlar, diarrésyndrom, misstänkta sexuellt överförda sjukdomar.

ELISA-tekniken hjälper till att bestämma ureaplasma och mycoplasma, syfilis och klamydia, tuberkulos och cytomegalovirusinfektion, herpes, viral hepatit och Epstein-Barr-virus. För närvarande kan cirka 500 olika infektioner verifieras med användning av enzymbunden immunosorbentanalys,

Om det finns misstankar om helminthiska angrepp och förekomsten av symtom som allergier, eosinofili i blodet, klåda i huden, dyspepsi och viktminskning,

Läs mer om denna typ av studie i artikeln "Blodtest för maskar och parasiter: forskningsmetoder, ELISA, till vem och hur man ska ta?".

Vid identifiering av allergener som orsakar Quinckes ödem, urtikaria, andnöd och astmaattacker.

I det här fallet upptäcks specifika IgE, och det finns hela allergopaneller som hjälper till att exakt bestämma allergenet - bläckfisk eller räka, torr fiskmat som innehåller dafnier, husdamm. Med pollinos gör denna metod dig möjlighet att hitta exakt spannmål, buske eller träd som orsakar vårnäsning och lacrimation,

  • Denna metod är indicerad för misstänkta autoimmuna sjukdomar som behandlas av reumatologer,
  • Om tumörtillväxt och aktivitet misstänks,
  • I den komplexa diagnosen immunbrist och HIV-infektion,
  • För blodsjukdomar och transplantologi, för en omfattande bedömning av immunitet, till exempel före en lever- eller njurtransplantation.

Nu vet vi varför vi måste donera blod till ELISA. Ta reda på hur denna studie genomförs..

Hur analys utförs?

Det klassiska materialet är patientens venösa blod. Men vid behov kan du undersöka en mängd olika vätskor och vävnader: slem, saliv, cervikalsekret, cerebrospinalvätska, glasögon, innehållet i navelsträngen och fostervatten. Det är viktigt att komma ihåg att att ta olika mediciner, överdriven fysisk aktivitet, alkoholmissbruk kan förvränga testresultaten..

Det finns flera metoder som tillåter denna analys. Oftast använder man den fotometriska metoden i kliniska laboratorier. I detta fall används färgmärkta substanser, efter vilken reaktion och markering av antigen-antikroppskomplexet, deras färg förändras. Som ett resultat förändras också den optiska densiteten hos lösningen, och denna förändring är direkt proportionell mot koncentrationen av de detekterade antikropparna. Laboratoriespektrofotometrar har använts för att mäta dessa avvikelser..

För att utföra ELISA används också en fluorimetrisk metod, vars bas är fluorescens. Här beräknas också intensiteten av fluorescerande ämnen som är avsatta på testproverna..

Slutligen använder immunologisk analys elektrokemiska metoder för att bestämma aktiviteten hos enzymer, som är speciella märken för antigener och antikroppar. Själva enzymimmunoanalysen involverar ofta användningen av enzymer såsom alkaliskt fosfatas, pepparrotsperoxidas och galaktosidas. Dessa enzymer kan binda till och märka antikroppar eller antigener på grund av deras aktivitet..

Nackdelar med metoden och dess fördelar

De uppenbara "plusserna" inkluderar den demokratiska kostnaden för analysen, möjligheten att screena den för stora grupper av befolkningen, till exempel när man undersöker gravida kvinnor för HIV. Enzymimmunanalysmetoden är ganska specifik och kan användas för att kontrollera kvaliteten på behandling av många sjukdomar. Det är viktigt att analysen förbereds snabbt och är enkel och säker för patienten..

Men det finns många "fallgropar." Så om immunoglobuliner inte upptäcks betyder detta inte 100% frånvaro av sjukdomen. Faktum är att kroppen mot bakgrund av immunbrist kanske helt enkelt inte har "styrka" i syntesen av antikroppar. Om patienten har allvarligt leversvikt kan levern helt enkelt inte syntetisera protein - byggnadsmaterialet för antikroppar. I detta fall kallas resultatet seronegativ, och bekräftelse av infektionen krävs genom den direkta och mest avancerade forskningsmetoden - PCR, eller polymeraskedjereaktion. Till skillnad från enzymbunden immunosorbentanalys, detekterar inte denna metod kroppens reaktion på den infektiösa processen (som kan vara defekt eller frånvarande helt), ärftligt material bestäms direkt av PCR, eller själva patogenen hittas.

En enzymbunden immunosorbentanalys kan ge ett fel mot bakgrund av många kroniska sjukdomar, mot bakgrund av immunsuppressiv terapi. Inom helminthology och parasitology finns det en lag: endast upptäckten av en parasit, eller dess ägg, är ett absolut tillförlitligt sätt att ställa en diagnos. ELISA kan ge korta och falska positiva metoder, som svarar på många normala händelser i patientens liv.

Sammanfattningsvis måste det sägas att den enzymbundna immunosorbentanalysen är en kraftfull men stödjande metod för laboratoriediagnos av många sjukdomar. Men i alla fall bör diagnosen ställas på grundval av många faktorer: klagomål och patienthistoria, undersökningsdata, andra stödjande och instrumentella diagnostiska metoder.

Publikationer Om Hjärtrytmen

Slag i örat, men inte ömt, vad ska man göra? Orsaker till blodpulsering i aurikeln och behandling efter otitis media eller sjukdomar

Öra är ett mänskligt organ som utför viktiga funktioner i kroppen, såsom uppfattningen av ljud, ger orientering i rymden.

Medicinsk historia

Vetenskap och paramedicinska anteckningarDisaggregant terapi under perioperativ period.Vad du ska göra före operationen: fortsätt att ta oeniga eller avbryta? Kanske en av de svåraste frågorna för läkare med olika specialiteter.