Enzymbunden immunosorbentanalys: avkodning, metoder

Med utvecklingen av besläktade vetenskaper som genetik, molekylärbiologi, kemi, liksom tillväxten av teknisk utveckling, har modern medicin innovativa diagnostiska metoder för en mängd olika mänskliga sjukdomar. De kännetecknas av hög noggrannhet i resultat och säkerhet i prestanda. Ett av dessa sätt att identifiera hälsoproblem är enzymbunden immunosorbentanalys. Det har vunnit utbredd popularitet under det senaste decenniet och har fått ett rykte som en mycket effektiv, pålitlig och patientvänlig metod för att upptäcka sjukdomar redan innan yttre symtom börjar. Vi kommer lätt att förklara vad den här typen av diagnos är, vad är principen för dess verkan, notera fördelarna, vi kommer att orientera oss i kostnaden för en sådan analys.

Kroppens svar på patogen flora

För att förstå hur, tack vare en enzymbunden immunosorbentanalys, laboratorietekniker diagnostiserar olika sjukdomar, är det nödvändigt att förstå den fysiologiska processen som sker i kroppen under infektion med infektioner. När en patogen mikroorganism kommer in i blodomloppet uppvisar det humana immunsystemet en skyddande reaktion i form av frisättning av vissa ämnen - antikroppar. De binder till cellen och analyserar om den är en del av kroppen eller har invaderat från utsidan. Om immunsystemet bestämmer att cellen är främmande börjar antalet antikroppar öka för att bekämpa den patogena mikroorganismen.

Antikroppar finns i många former och har sina egna egenskaper. Vissa ämnen förekommer direkt under infektionsperioden, andra kvarstår hela människans liv och det är tack vare dem att de utvecklar en stabil immunitet mot en specifik sjukdom. Proteinstrukturer är indelade i följande typer: A, D, E, M, G. I medicinen kallas antikroppar immunglobuliner. Därför är det vanligt att beteckna indikatorerna för dessa ämnen i latinska bokstäver Ig.

Enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA) är baserad på data från medicinsk kunskap. Med användning av speciella antigener i laboratoriet är det möjligt att bestämma närvaron eller frånvaron av vissa antikroppar i biologiskt material. Baserat på resultaten från en sådan analys kan läkaren ställa en diagnos, samt fastställa inte bara förekomsten av en patologi, utan också begränsningen av dess ursprung, för att identifiera faranivån för patienten. En enzymbunden immunosorbentanalys oftare än andra undersöker närvaron av antikroppar från grupperna M och G.

Vad är en IFA??

Faktum är att en enzymbunden immunosorbentanalys inte är en nyhet i det moderna samhället. Det uppfanns redan på 80-talet. Men för att utföra sådana studier krävdes skrymmande dyr utrustning. Därför användes denna metod endast i speciellt utrustade vetenskapliga laboratorier: den användes för att skriva celler och vävnader. Men då fick han inte bred distribution inom diagnostisk medicin, att använda det var tekniskt svårt och extremt dyrt. Endast med utvecklingen av teknik och uppfinningen av biopolymermaterial förbättrades ELISA. Därefter började metoden att populariseras och få förtroende för medicinska kretsar.

Som nämnts ovan involverar denna metod detektering av vissa grupper av immunglobuliner i biomaterialet - blod, fostervatten, glaskropp eller cerebrospinalvätska -.

Det finns studier utan att applicera antigen på ytan och enzymbunden immunosorbentanalys, vilket involverar reaktionen i speciella brunnar. Den senare metoden har stor känslighet och tillförlitlighet, därför är det på detta sätt en analys utförs i medicinska laboratorier för att upptäcka mänskliga sjukdomar.

Enzymbunden immunosorbentanalys

Beroende på den påstådda sjukdomen används det nödvändiga antigenet från det enzymbundna immunosorbentanalyspaketet, som under den kemiska reaktionen i närvaro av infektion kommer att binda till den patogena floran. Denna process kallas ett immunsvar..

Sedan, för att visuellt bestämma resultatet av studien, genomföra den enzymatiska fasen av ELISA. Det involverar färgning av materialet med hjälp av specialreagens. I denna studie används enzymer som alkaliskt fosfatas, peroxidas och avidin. Beroende på färgen som erhållits under kemiska reaktioner bestäms resultatet av enzymimmunoanalys.

Vad är kolorimetri??

Analysen av den enzymatiska diagnosfasen utförs med metoden, som kallas "kolorimetri". Faktum är att inte bara materialets färg ger information om infektionen utan också färgtätheten till följd av kemiska reaktioner. Det är denna indikator som bestämmer koncentrationen av den patogena mikroorganismen. Om den manuella diagnostikmetoden används på gammalt sätt, byggs en speciell kalibreringsgraf för att bestämma dessa indikatorer.

I moderna laboratorier används den manuella metoden sällan i dag. För analys av ELISA används en specialapparat - en kolorimeter, där endast forskningsparametrar ställs in manuellt, och sedan utförs allt arbete, inklusive plottning, automatiskt.

ELISA-metoder

Det finns direkta och indirekta metoder för enzymimmunanalys. Den första visningen tar mindre tid, eftersom den bara har tre utförande steg. Först tillsätts specifika antikroppar till antigenen i testmaterialet placerat i speciella brunnar. Därefter avlägsnas deras överskottsmängd och den enzymatiska fasen i analysen, varigenom man erhåller resultatet.

Den indirekta metoden används mycket oftare, eftersom den har en högre känslighet jämfört med den direkta diagnosmetoden. Vid genomförandet används en dubbelstudie. Antigenet är nämligen först associerat med en omärkt antikropp och sedan med en märkt. Denna process tar mer tid, men resultatet är det mest exakta..

Reagenssatser

Enzymbundna immunosorbentanalyssatser produceras av olika tillverkare i en mängd olika konfigurationer. I Ryssland är det erkända företaget Union of Medical and Biologic. Denna tillverkare producerar reagenssatser för ELISA-studier av nästan alla infektioner som är vanliga i våra breddegrader som kan analyseras på detta sätt. Förutom reagenserna ingår ytterligare material i satserna, vilket säkerställer säkerhet, bekvämlighet och analyshastighet. Dessutom målas kemiska ämnen i olika färger, vilket minskar sannolikheten för ett fel i valet av reagenslaboratoriumassistent.

Kemisk-biologiska uppsättningar skiljer sig i relativ tillgänglighet, vilket direkt påverkar fördelningen och tillgängligheten av enzymimmunoanalys för befolkningen.

Diagnostisk metod Fördelar

Utan tvekan har enzymimmunanalys ett antal fördelar jämfört med andra diagnostiska metoder:

  1. Med det kan du till och med bestämma den obetydliga förekomsten av patogena organismer, vilket indikerar testets höga känslighet..
  2. Förmågan att upptäcka en sjukdom i de tidigaste stadierna, vilket kraftigt ökar risken för ett framgångsrikt botemedel.
  3. Enkelhet och bekvämlighet med att ta biologiskt material. En sådan analys utförs både i privata laboratorier och i statliga. Vid behov kan sjuksköterskan ta materialet från patienten hemma.
  4. En analys kräver en mycket liten mängd biomaterial.
  5. Snabbt resultat. Med modern medicinsk utrustning kan du utföra analys under dagen.
  6. Förmågan att upptäcka latenta asymptomatiska former av infektion.
  7. Studera tillgänglighet.
  8. Vid behov är massaundersökningar med denna metod möjliga..
  9. Det är möjligt att spåra utvecklingen av sjukdomen och effektiviteten hos den föreskrivna behandlingen, eftersom det är möjligt att utföra en ELISA-analys många gånger helt säker för patienten.
  10. Automatisering av analysstegen, vilket eliminerar den mänskliga faktorn och ökar tillförlitligheten hos resultaten.
  11. Reagenser för ELISA lagras under lång tid - ungefär ett år.
  12. Analysen är möjlig med fluktuationer i omgivningstemperatur..

Immunglobuliner i grupp M

Antikroppar från grupp M produceras av immunsystemet omedelbart efter detekteringen av ett främmande antigen. Om enzymimmunoanalysen avslutades med detekteringen av sådana ämnen i biomaterialet, indikerar det därför ett akut steg i sjukdomsförloppet, den primära infektionen. Immunglobuliner från grupp M kan finnas i kroppen i upp till en månad, beroende på infektionssort. Sedan minskar antalet för att fullständigt försvinna.

Immunoglobuliner i grupp G

Proteinstrukturer av typ G verkar ersätta immunoglobuliner i grupp M. Dessa ämnen ger stabil, i de flesta fall, livslång immunitet mot sjukdomen. Bestämning av proteinstrukturen för IgG i testmaterialet indikerar att kroppen tidigare har träffat en patogen och har en skyddande reaktion från återinfektion.

Indikationer för diagnos

En enzymbunden immunosorbentanalys används för att bestämma olika infektionssjukdomar, hormonella tillstånd och allergitest utförs. Nämligen:

  • bestämma nivån på sköldkörtelhormoner;
  • indikatorer för den reproduktiva hormonella panelen;
  • tumörmarkörer;
  • upptäcka patogener av infektionssjukdomar såsom cytomegalovirus, hepatit, toxoplasma, rubella, mässling, tuberkulos, klamydia, syfilis, mycoplasma, ureplasma, candida, giardia och till och med HIV;
  • de diagnostiserar autoimmuna sjukdomar. I synnerhet används enzymimmunanalys för att studera sköldkörtelhormoner: TSH, TG, T3 och T4.

Förutom diagnostiska ändamål används metoden enzymimmunoanalys i medicinsk forskning.

Hur tas materialet?

I de flesta fall rekommenderas provtagning av venöst blod för analys. Efter bearbetning och beredning av materialet för studien utförs en enzymbunden immunosorbentanalys för serum eller plasma.

Studien av den hormonella panelen kräver särskild uppmärksamhet, eftersom det i detta fall är oerhört viktigt att ta hänsyn till funktionerna i materialintaget. Till exempel kräver diagnosen av de flesta hormoner i en kvinnas reproduktionssystem att ta venöst blod på vissa dagar av menstruationscykeln. Ett antal andra hormoner påverkas av yttre faktorer: säsongsbetonade, tid på dagen, patientens psykologiska tillstånd och mycket mer. Om du inte tar hänsyn till specifika faktorer kan du få ett falskt resultat, vilket kommer att leda till en förvärring av sjukdomen eller felaktig ordinerad behandling.

I vissa, ofta mer komplicerade fall, kan analys kräva cerebrospinalvätska, glasartad humor eller fostervatten hos en gravid kvinna. Förfaranden för insamling av dessa biologiska material innebär en viss risk, har kontraindikationer och en återhämtningsperiod. Därför bör en sådan enzymbunden immunosorbentanalys endast utföras enligt läkarnas vittnesmål och under hans professionella övervakning. Avkryptering i detta fall kräver speciell medicinsk kunskap och kan ta lite tid.

Analysförberedelse

En enzymkopplad immunosorbentanalys bör genomföras, i enlighet med alla rekommendationer, eftersom yttre faktorer påverkar studiens resultat. Till exempel är det viktigt att donera venöst blod på tom mage på morgonen (upp till 11 timmar). 2 veckor innan det påstådda intaget av materialet måste du sluta ta mediciner, särskilt hormoner. Några dagar före studien bör du avstå från att dricka alkohol och feta livsmedel, samt utesluta fysisk aktivitet, oro och stress..

Avkryptering av resultaten

Att dechiffrera resultaten av en enzymbunden immunosorbentanalys kräver särskild kunskap om egenskaperna hos proteinstrukturerna (antikroppar), som beskrivits ovan (IgG och IgM). I enlighet med dessa data analyseras forskningsindikatorer. Tabellen beskriver alternativen som kan erhållas under analysen:

Enzymimmunanalys: ett transkript
Immunoglobuliner MImmunoglobuliner GPåstådd dekryptering
negativtnegativtKroppen har aldrig upplevt denna infektion. Det finns varken en patogen eller antikroppar mot den.
negativtpositivtKroppen har utvecklat en stark immunitet mot infektion..
positivtnegativtAkut infektionsform.
positivtpositivtTroligtvis primär infektion, men ytterligare diagnostiska test krävs.

Genom att analysera den presenterade tabellen kan vi dra slutsatsen att i de flesta fall krävs ytterligare studier för att bekräfta diagnosen. Enzymbunden immunosorbentanalys ensam kan inte ge ett definitivt svar. Normen i detta fall har inga tydliga gränser: de detekterade proteinerna i grupp G indikerar endast att kroppen tidigare har infekterats med en bestämd patogen. Men samma resultat kan indikera förekomsten av en akut fas - det är viktigt att jämföra många faktorer och indikatorer för att ställa rätt diagnos.

Riskfaktorer

ELISA är 90% korrekt. Ändå finns det riskfaktorer som påverkar snedvridningen av det diagnostiska resultatet: funktionsfel i utrustningen, felaktig materialuppsamling, lagring och transport, utan hänsyn till andra externa faktorer.

Diagnostik efter blodtransfusion, hemolys, kirurgi, biopsi eller punktering av biologiskt material rekommenderas inte - detta kan också påverka resultaten av indikatorer.

Analyskostnad

Kostnaden för en diagnostisk studie har ett brett spektrum och beror på typen av analys och antigenet som ska bestämmas, eftersom baserat på dessa faktorer beräknas kostnaden för reagenssatser och analysens komplexitet. Men i de flesta fall är enzymbunden immunosorbentanalys tillgänglig för många patienter. Priset är från 300 r. upp till 2000 r.

ELISA är en prisvärd, snabb och mycket effektiv metod för att diagnostisera en stor lista över sjukdomar. Men endast en kvalificerad läkare är berättigad att dechiffrera resultaten och ställa en diagnos.

IFA: hur genomförs analysen? Kosta. Avkryptering av resultaten

Analysmetoder med hög precision är en integrerad del av modern medicin och i synnerhet diagnostik. Diagnostiska metoder som finns tillgängliga under vår tid gör det möjligt att i tid identifiera inte bara faktum på närvaro, utan också antalet parasiter i patientens kropp.

Nu, som regel, uppmanas patienter att genomgå endast ett test - enzymimmunanalys.

Användning av ett ELISA-blodprov

Enzymbunden immunosorbentanalys är en mycket specialiserad typ av analys som utförs i ett laboratorium. Analysen är baserad på kroppens reaktion, ofta kallad en "antigen-antikropp".

En analysmetod baserad på denna indikator ger en noggrannhet på 99%. Detta är den mest exakta metoden för närvarande. I praktiken fanns det nästan inga fall då en sådan analys gav falska resultat.

Med denna metod kan du identifiera:

  • ett betydande antal infektionssjukdomar orsakade av parasiter;
  • närvaron av olika typer av tumörmarkörer;
  • inom reproduktionsmedicin - närvaron av proteiner, hormoner och peptider som är nödvändiga för att bedöma patientens fertilitet;

Tillförlitligheten hos testresultaten beror på flera faktorer:

  • en specifik typ av parasit;
  • antalet parasiter i kroppen;
  • avelshastighet.

I vilka fall används denna typ av analys?

Enzymbunden immunosorbentanalys används i stor utsträckning vid diagnosen olika sjukdomar. Dess huvudvärde är att det låter dig identifiera exakt sjukdomar som är asymptomatiska.

Som ni vet är sådana sjukdomar ofta svåra att upptäcka i ett tidigt skede och börja behandlas i tid.

Vilka sjukdomar diagnostiseras med enzymimmunanalys:

  • onkologiska sjukdomar;
  • sexuellt överförda infektioner (HIV, klamydia, syfilis, ureaplasmosis, herpes och andra sjukdomar);
  • tuberkulos, mässling, toxoplasmos, hepatit och så vidare;
  • sköldkörtelhormoner;
  • könshormoner;
  • olika autoimmuna störningar;
  • allergiska reaktioner och intolerans mot vissa livsmedel.

Vilka faktorer är baserade på ELISA?

Den här proceduren hjälper till att identifiera:

  • infektion av kroppen med bakterier och virus;
  • proteinbas;
  • helminthiska angrepp;
  • främmande kroppar.

I själva verket består IFA-förfarandet av två delar:

  1. immunsvar;
  2. enzymatisk reaktion.

Kärnan i principen om "antigen-antikropp" är att patogen eller främmande kropp, det vill säga antigenet, kommer gradvis in i kroppen tillsammans med infektionskällan. Denna process orsakar det så kallade immunsvaret, utformat för att skydda kroppen från främmande element..

Manifestationerna av ett sådant skydd beror på själva antigenet och på symtomen på sjukdomen orsakad av det. Detta schema kallades "antigen-antikropp".

För större diagnostillförlitlighet utförs hela enzymbunden immunosorbentanalys endast i laboratorier och medicinska centra. Olika antigener och antikroppar interagerar med ett blodprov..

För att identifiera både typ och kvantitet av parasiter i patientens kropp, används immunglobulin i klasserna "A" och "E", som svarar på parasitiska angrepp.

En sådan analys bör identifiera:

Vad är ett immunsvar och hur antigenigenkänning bestäms?

Immunsvaret visar biologiska samband i molekylerna i mikrobiella celler, vars närvaro analyseras. Immunresponsen som sådan är endast en av komponenterna i ett omfattande ELISA-program, medan den andra komponenten är en enzymatisk reaktion.

Erkännande av antigenet sker i kontakt med en cell i immunsystemet (immunocyt) med en främmande cell. Antigenens individuella egenskaper fungerar som ett medel för att känna igen en vän eller fiende för immunsystemet.

Vad är antikroppar?

Faktum är att antikroppen:

  • Det är bara en molekyl som ligger på ytan av en immunocyt.
  • Denna molekyl används för att känna igen främmande celler..

Överföring av information om antigen sker på cellnivå. Bindningen förstörs om cellen är immun, om inte, utlöser kroppen en naturlig defensiv reaktion.

Modern vetenskap känner till 5 klasser av antikroppar, annars kallade immunoglobuliner eller proteinstrukturer.

Latinska bokstäver används för att beteckna antikroppar: A, D, E, G och M.

I analysresultaten ser dessa notationer så här:

Enzymbunden immunosorbentanalys

Först och främst är det nödvändigt att framställa speciella polystyrentabletter som innehåller 96 hål. Innan analys behandlas väggarna i varje cell med ett absorberande antigen..

Serum droppas in i de behandlade cellerna. Homologa antikroppar och antigener reagerar med varandra och bildar starka bindningar. Omonterade kroppar tvättas ut. Därefter tillsätts antikroppar av immunoglobuliner till brunnarna tillsammans med enzymelement markerade på ett speciellt sätt.

Reagens är märkta för att underlätta identifiering av antikroppar i det analyserade serumet. Efter tvättning tillsätts ett kromogent element som påskyndar reaktionen och tonar brunnarna. Färgintensiteten jämfört med det studerade enzymet visar ungefärligt procenttal antigen i blodprovet.

Laboratorietekniker använder sedan optisk vätska för att:

  • mäta koncentrationen av antikroppar i brunnarna;
  • Jämför resultatet med ett kontrollprov, det vill säga en standard;
  • beräkna koncentrationen av antikroppar med hjälp av en speciell skala.

För analys av helminthiska angrepp används en speciell version av testsystemet, med en egen uppsättning normindikatorer och avvikelser från det.

Analysförberedelse

Serumprovtagning för enzymimmunanalys utförs endast på laboratoriet. De tar blod från en blodåra, tar bort element därifrån som kan påverka analysprocessen och resultatens noggrannhet. Ta en analys på tom mage på morgonen.

Avkodning av resultaten av enzymimmunanalys

Kvaliteten och mängden antikroppar indikerar närvaron av främmande element i patientens kropp, inklusive patogener. Samma tecken tyder på att den inflammatoriska processen har börjat i kroppen.

Ett exempel på avkodning av resultaten från ELISA:

Steg av sjukdomenIgAIgMIgG
Primär (2 veckor efter infektion)+--
Primär (2,5-3 veckor efter infektion)++-
Primär (3-4 veckor efter infektion)+++
Förvärring av den kroniska fasen (2 veckor från början av förvärring)+-+
Kronisk+/--+
Tidigare (infektion botad)--+
ÅterhämtningTitern minskade med 2-4 gånger efter framgångsrik behandling-Titern minskade 4-8 gånger efter 1-1,5 månader efter framgångsrik behandling
Negativt resultat---

I sig själv gör den kvantitativa analysen som utförts med denna metod ännu inte det möjligt att noggrant diagnostisera sjukdomen, föreskriva ett behandlingsförlopp och bestämma doseringen av läkemedel.

Fördelar och nackdelar med IFA

Alla testmetoder, även den mest avancerade och högprecisionen, har tyvärr, utöver fördelar, sina nackdelar..

Fördelar med enzymimmunanalys:

  • Specialisering av den diagnostiska metoden;
  • Överkänslighet mot denna metod;
  • Tillämpa den senaste tekniken.

Känsligheten för den diagnostiska metoden är stor sannolikhet för att detektera det önskade, även om dess koncentration i testmaterialet är extremt låg.

Metodens specificitet betyder:

    en hög grad av säkerhet, det vill säga det finns ingen risk att få ett felaktigt resultat. Om resultatet är positivt, garanteras patienten att det är den typ av parasit som han lider av;

  • påverkan på resultatet av den "mänskliga faktorn", det vill säga eventuella fel hos laboratorieassistenten, reduceras till noll, vilket också bidrar till ökad noggrannhet.
  • Möjliga nackdelar med denna analysmetod:

    1. Det handlar om att bestämma sjukdomens natur, det vill säga intuitivt att "gissa" att rätt diagnos i detta fall är omöjligt;
    2. Hög analyskostnad.

    Jämförelse av duodenal och direkt enzymimmunanalys

    ELISA-proceduren använder direkt antikropparnas förmåga att hitta antigen och bildar länkar med etiketter. Denna analysmetod anses vara industriell, väntetiden för resultatet är högst en timme.

    Ett speciellt etikettunderlag visas efter jäsning. Nivån av antikroppar motsvarar andelen antigener i det studerade biomaterialet.

    Det finns också en duodenal (annars indirekt) metod för testning för parasitiska angrepp, som används allmänt, trots ELISAs höga noggrannhet.

    Duodenal (indirekt) enzymbunden immunosorbentanalys utförs i två steg:

    1. Först jämförs märkta antikroppar med de önskade antigenen;
    2. Märkta antikroppar appliceras på omärkta antikroppar detekterade i föregående steg..

    Således uppnås dubbel kontroll av antigener och antikroppar, vilket ökar tillförlitligheten hos analysen..

    Med indirekt ELISA i laboratoriet fixeras antigenet på hålets yta, det bildar bindningar med den omärkta delen av antikropparna.

    Fördelar med duodenalmetoden:

    • Dubbel kontroll av det studerade biomaterialet, vilket avsevärt ökar noggrannheten;
    • Ökad noggrannhet och specificitet i själva analysmetoden.

    Men denna metod tar mycket tid och innebär ett antal ytterligare åtgärder. Studiens noggrannhet är dock så hög att den motiverar denna nackdel. Av denna anledning rekommenderar de flesta läkare duodenal analysmetod..

    Vart man ska gå, hur länge man ska vänta och hur mycket man ska betala?

    Om du har alla nödvändiga verktyg och förnödenheter kan du få resultatet två dagar efter leveransen. Om laboratoriet har en expressanalystjänst kan ett prov behandlas på bara 3-5 timmar.

    Var kan jag ta IFA:

    • i statens poliklinik;
    • i privata kliniker.

    Priserna för enzymimmunanalys beror direkt på prisnivån i en viss klinik, i genomsnitt är priset minst 4000 rubel.

    Informationen som erhållits som ett resultat av denna studie kan vara ett användbart bidrag till medicinsk vetenskap. Patienten bör dock komma ihåg att eftersom kostnaden för en enzymimmunanalys är så hög, skulle det vara klokare att anförträda detta förfarande till en pålitlig, tidtestad klinik.

    Tyvärr är statliga medicinska institutioner inte alltid utrustade med den senaste vetenskapen. Det kan inte finnas nödvändiga enheter för högkvalitativ insamling av biomaterial och dess behandling i en distriktsklinik.

    Så, vad som är användbart för patientens enzymimmunanalys:

    • låter dig upptäcka helminthisk invasion i ett tidigt skede;
    • som en följd av detta, låter dig starta behandlingen i tid;
    • metodernas stabilitet gör det möjligt att analysera med lika noggrannhet hos barn och vuxna.

    En enzymimmunanalys visar inte bara en kvalitativ, utan också en kvantitativ faktor, det vill säga, det indikerar inte bara faktumet på närvaron av helminter i patientens kropp, utan gör det också möjligt att uppskatta deras antal.

    Enzymimmunanalys med en uppdelning av indikatorer

    Immun- och enzymatiska reaktioner

    Som namnet antyder inkluderar ett IFA-blodprov flera komponenter, nämligen en immun- och enzymatisk reaktion.
    En immunreaktion låter dig ansluta cellelement och patogener, medan en enzymatisk ger dig möjlighet att visualisera och utvärdera resultatet av en tidigare reaktion.

    Överväg varje reaktion mer detaljerat..

    Vad är immunsvar??

    Immun är specifika reaktioner som gör att du kan binda ett antigen till en antikropp och skapa ett immunkomplex. Vad betyder det här? Först och främst är det nödvändigt att förstå att vilken cellyta som helst innehåller molekyler som innehåller data om cellen, kallad antigen och uppdelad i:

    Enskilda antigener har, trots vissa likheter, många skillnader. De finns i en viss organisme och upprepas aldrig i andra. Artenantigener finns i organismerna av olika typer av levande saker. Så, till exempel, apor, hästar eller hundar har sina egna, till skillnad från något antigen. Det är därför antigen av denna typ används av immunsystemet för att känna igen sina egna och främmande celler, vilket faktiskt är grunden för enzymet immunanalys.

    Hur känns igen antigen? Allt är klart nog här. Enkelt uttryckt fångar en immuncell en cell som har orsakat den att "misstänka" och jämför dess antigen med beskrivningen i åtanke. Om antigenen i den tvivelaktiga cellen motsvarar den, "frigör" immuncellen den och fortsätter. Om beskrivningen är annorlunda, är organismens svar på hotet en - förstörelse. Dessutom är erkännandet av "fienden" i detta fall nästan 100%.

    Immunoanalys av sandwich-typ

    Fikon. 2. Schematisk framställning av immunoassay-typen "sandwich". ATP är en antikropp på ett substrat, ATd är en detekteringsantikropp, AH är en antigen, M är en etikett kovalent kopplad till en detekteringsantikropp, P är ett substrat på vilket antikroppen på substratet adsorberas.

    I denna variant av immunoanalys (fig. 2) används ett par antikroppar specifika för rumsligt avlägsna epitoper av det studerade antigenet.

    I. Adsorption av substratantikroppar

    I brunnarna på en 96-brunns immunoassay-platta sorberas substratantikroppar med 1-2 μg per brunn i 100 μl fosfatbuffrad saltlösning (PBS). Inkubation utförs i 30 minuter vid rumstemperatur och skakas på en horisontell tablettskakare. Tvättning (tvåfaldig) av obundna antigenmolekyler utförs med fosfatbuffrad saltlösning innehållande 0,1% Tween-20 (PBST).

    II. Låsa

    För att blockera icke-specifika bindningsställen fylls plattbrunnar med PBST och inkuberas under 10-15 minuter vid rumstemperatur.

    III. Antigeninkubation

    50 ul av testlösningen eller standardutspädningar av antigen sättes till brunnarna i den förförsorberade antikroppsplattan. Antigenutspädningar bör beredas på basis av PBST, eftersom Tween-20 reducerar den ospecifika bindningen av proteinmolekyler till varandra och till tabletten. Både testlösningen och standardutspädningar av antigenet införs i par (eller 3 replikat) med användning av två (tre) brunnar för varje proteinutspädning. Inkubation utförs vid rumstemperatur under 30 minuter under konstant omröring. Tvättning utförs med PBST-lösning 3 gånger.

    IV. Inkubation av enzymmärkta antikroppar

    100 ul av en lösning av specifika antikroppar konjugerade med en enzymmarkör tillsätts till plattans brunnar. Den optimala koncentrationen av konjugerade antikroppar indikeras vanligtvis av tillverkaren (använd vanligtvis en koncentration av 2-4 μg / ml). Inkubation med antikroppar innehållande enzymetiketten utförs under 30 minuter vid rumstemperatur och skakas på en horisontell plattskakare. Tvättning utförs med PBST 5-6 gånger.

    V. Genomföra en enzymatisk reaktion åtföljd av utseendet på en färgad produkt

    100 ul substratlösning sättes till brunnarna och inkuberas under 10 minuter vid rumstemperatur under konstant omrörning..

    VI. Stoppa den enzymatiska reaktionen

    Innan mätning av den optiska densiteten stoppas en färgreaktion med användning av 0,5 M H24. Efter inkubation tillsättes 50 ul av en lösning av 0,5 M svavelsyra till brunnarna med en arbetslösning av RPD. Efter det kan du omedelbart börja mäta den optiska densiteten.

    VII. Absorbansmätning

    Den optiska densiteten för lösningen av den färgade produkten mäts vid X = 490 nm med användning av en tablettspektrofotometer.

    tryckversion

    Mer om immunoglobuliner

    Totalt producerar den mänskliga kroppen 5 kända klasser av antikroppar, som betecknas Ig (som står för immunoglobuliner), som tillhör klasserna A, M, G, E och D. Alla av dem är av stor vikt vid tolkningen av resultaten från ELISA. Naturligtvis finns det mycket mer komplex, och inte alla är fortfarande öppna. Men vid diagnosen olika sjukdomar är de första tre typerna av antikroppar mest värdefulla. Ett ELISA-blodprov använder maximalt information: ögonblicket för antikroppar i blodet, förändringen i deras koncentration beroende på tid, försvinnningsperioden, och typen av specifik antikropp.

    Deltagare i den primära, akuta infektionsprocessen är alltså immunglobuliner av klass M, som alltid indikerar en akut fas, även när sjukdomen raderas kliniskt. Ett typiskt exempel är den anterteriska formen av akut viral hepatit B eller C. En enzymbunden immunosorbentanalys för hepatit kommer att visa att en person har akut hepatit, och symtom som hypokondri, munnorrhet, värkande leder och andra icke-specifika symtom är lätt att förstå.

    Efter flera veckor hittas dessa antikroppar i en alltmer försvinnande koncentration, vilket ger immunglobuliner av klass G. De upptäcks i blodet i månader, till och med år, och indikerar endera återhämtning och kan sedan stanna kvar i livet och bilda en stark immunitet. Detta indikerar ett kraftfullt försvar mot patogenantigener. Så det är antikropparna i denna klass som gör en person immun mot upprepade fall av miltbrand och pest. Men det finns tillfällen då dessa antikroppar inte stör antigenens skadliga effekter. I det här fallet kan vi prata om att öka aktiviteten i den kroniska processen.

    Vad gäller IgE har den tillämpningar för diagnos av olika parasitiska infektioner och allergiska tillstånd, och IgD har en extrafunktion: den enzymbundna immunosorbentanalysen gör att du kan använda den vid den omfattande diagnosen bronkialastma och autoimmuna tillstånd. Naturligtvis är det mycket mer komplicerat att dechiffrera ELISA-analysen, och immunologer kan berätta mycket mer. Vilka är indikationerna på att patienten självständigt kan gå till laboratoriet för att utföra studier?

    Hur analyserar ELISA

    Under villkoren för utrustade laboratorier och medicinska centra kan treponemal bestämning med enzymimmunoanalysen utföras med flera metoder, som kallas direkt och indirekt. Men basen för dessa reaktioner är ett sätt som gör att du kan analysera för syfilis av ELISA. Detta test utförs på ett visst sätt..

    Laboratoriets läkare har en speciell tablett - en panel med hål i form av runda hålrum i mängden upp till hundra. De speciellt framställda koncentrerade syfilisantigenerna används också i satser för denna analys, som placeras i ELISA-plattans brunnar. Efter att ha tagit patientens blod på morgonen på tom mage separeras serum från blodet och placeras i brunnar med antigener. Antigen-antikroppsbindningsreaktion uppträder i brunnar.

    ELISA för syfilis är baserad på reaktionen på bindning av immunföreningarna i det första steget och konjugat med en speciell enzymmarkör, som krävs för att läsa reaktionens kvalitet. I detta skede införs förutom enzymatiskt peroxidas, kromogena färgämnen för att färga materialet beroende på resultatet av reaktionen.

    Baserat på de framträdda färgade hålen i surfplattan dekrypteras testet. I uppsättningar av olika ELISA-metoder bifogas tabeller över färgscheman, som bestämmer mängden, nivån av immunglobuliner, antikroppar från patientens serum i en enhetsvolym.

    För att utvärdera resultatet av reaktionen används också specialutrustning - en spektrofotometer för fotometri och uppskattning av materialets densitet i brunnarna jämfört med kontrollprover. Baserat på densiteten erhålls ett resultat som är klart fastställt för varje orsakande syfilismedel inom gränserna för normer och patologi.

    allmän information

    En enzymbunden immunosorbentanalys kan användas för att bestämma nivån av hormoner, immunoglobuliner, immunologiska komplex såväl som ett antal biologiskt aktiva substanser. Som ett material för en sådan studie kan du donera blod, cerebrospinalvätska, innehållet i glaskroppen etc..

    En enzymbunden immunosorbentanalys har nyligen använts alltmer på grund av ett antal fördelar:

    • känslighet över 90 procent;
    • stabil lagring av ingredienser som behövs för hållning;
    • snabb och enkel diagnostik;
    • minimikostnader för material;
    • automatiserad process;
    • låg kostnad.

    Dessutom låter ELISA identifiera infektioner, inklusive hepatit, i ett tidigt skede. Det är därför det ibland rekommenderas istället för PCR-studier, samt under graviditet. Men det gör inte utan nackdelar. Resultaten av sådana tester kommer bara att prata om kroppens svar på patogenen, men det kommer inte att fastställas. I de flesta fall rekommenderas en kombination av ELISA och PCR..

    Med hjälp av IFA-testning kan du ta reda på resultaten från en hel uppsättning. I synnerhet bestäms normen för sköldkörtelhormoner, närvaron av tumörmarkörer och ett antal infektioner. Normen väljs separat för varje indikator. Så för vuxna bör ELISA normalt visa TG-värden inom 70 IE / ml, T4 i området 64 till 146 nmol / L, T3 beräknas i mängden 1,8-2,8 nmol / L.

    Vid planering av en graviditet kan sådana tester göras för att bestämma könshormoner. I synnerhet luteinisering. Dess värden kommer att variera beroende på cykeldagen. I synnerhet är det maximala värdet som kan observeras 150 och det minsta 1 mU / L.

    När ELISA används för att bestämma könshormonet hos män, är en siffra i intervallet 0,5 till 10 mU / L en normal indikator. Om kronisk gonadotropin undersöks kommer resultaten att variera beroende på kön. Speciellt för vuxna män och kvinnor i frånvaro av graviditet bör indikatorn vara inom 5 mU / ml. Om testning utförs under graviditeten kan resultaten vara olika beroende på trimestern upp till tiotusentals enheter.

    Vad är klamydia

    PCR, liksom ELISA, används ofta i moderna laboratorier för diagnos av sexuellt överförda sjukdomar. Samtidigt föreslår läkare ofta att utföra båda testerna. Många patienter tror att detta är en extra pengar, men dessa test har en allvarlig skillnad, även om de vid första anblicken kan verka identiska. En klassificering av psykologiska forskningsmetoder kan dock till viss del tillämpas.

    Resultaten av PCR och ELISA används ofta under graviditet, när det är nödvändigt att utesluta klamydial infektion. Ofta är ett så positivt resultat för infektionen ett svar på frågan om män och kvinnor, "Varför kan jag inte bli gravid". Förutom risken för infertilitet utgör klamydia under graviditeten en risk för infektion hos barnet.

    Det huvudsakliga problemet för diagnos av en sådan infektion är den asymptomatiska kursen. Emellertid kan specifika antikroppar detekteras tio dagar efter infektion. Om ett PCR-test under graviditeten visar på förekomsten eller frånvaron av sådana patogener, kommer ELISA att berätta vilket steg processen är nu

    En sådan studie är också viktig för att utvärdera resultaten av terapi.

    Avkodningsanalys

    En analys av hepatit eller någon annan patogen i ELISA-prestanda väcker ofta frågor. Särskilt hur dekrypteringen genomförs. För tillfället indikerar resultaten ett av fem immunoglobuliner: IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. Det är de som sticker ut, eftersom de andras roll inte har klargjorts till slut. De viktigaste för studien är klasserna A, M och G.

    Immunoglobulin A är huvudsakligen ansvarig för skyddande funktioner i slemhinnorna. Resultatet av deras närvaro kommer att vara negativt om sjukdomen identifieras i sin akuta form i början. Utseendet på sådana skyddsmarkörer förekommer vanligtvis två veckor efter sjukdomens början. Ibland erhålls ett positivt resultat även senare.

    Huvudfunktionen för dessa antikroppar är detektion och förstörelse av mikroorganismer. Deras antal minskas alltid om sjukdomen avtar. Vanligtvis, efter åtta veckor från sjukdomens början, kommer ett positivt resultat att vara frånvarande. Detektion av immunglobuliner i klass A vid ett senare datum kan indikera en process som flyter in i en kronisk.

    De viktigaste markörerna, vars avkodning hjälper till att bestämma den akuta fasen i patologin, är immunglobuliner av klass M. De kan upptäckas i blodet fem dagar efter infektion. De försenas i blodet i cirka sex veckor, varefter deras försvinnande inträffar snabbt.

    Immunoglobuliner av klass G är ansvariga för bildandet av en kvarvarande immuneffekt. Cirka en månad efter infektion börjar de upptäckas i blodet. I framtiden sträcker sig deras definition under många månader. Ofta kan du observera dem hela ditt liv. Sådana immunoglobuliner bildas som en skyddande reaktion, vilket eliminerar re-infektion. Exempelvis bildas sådana immunglobuliner i blodet hos en person som hade vattkoppor under barndomen och följaktligen fick immunitet till slutet av livet. Naturligtvis finns det andra infektioner vars återkomst är möjlig. I detta fall kommer analysen att detektera återväxt av denna grupp immunglobuliner.

    Immunoglobuliner E används för att upptäcka parasiter i kroppen. Immunoglobulinet som tillhör grupp D är beläget i B-lymfocyter och finns i vissa mängder hos friska människor. Vid ungefär tio års ålder når de sina maximala värden. Mängden sådant immunglobulin ökar under graviditeten. Dessutom kan närvaron av det i en större mängd än vanligt vara ett tecken på bronkialastma, ett immunbristillstånd.

    dekryptering

    Antikroppar, de är också immunoglobuliner, är indelade i fem klasser, men vanligtvis bestäms endast tre av dem: M, G och A, som ackumuleras i kroppen under olika perioder efter infektion.

    Immunoglobuliner M visas först, de är IgM. De uppstår från 4-5 dagar efter infektion och är i blodet i en och en halv månad, varefter de försvinner. Om ELISA visar sin närvaro har vi att göra med en akut period av sjukdomen eller dess förvärring.

    På tre till fyra veckor inträffar IgG, det vill säga immunglobuliner av klass G. De kan vara närvarande i flera månader eller till och med år i rad. Om ELISA utfördes två gånger med ett intervall på två veckor, och mängden IgG i båda proverna ökades, kan vi prata om infektion eller re-infektion med den.

    IgA, det vill säga antikroppar av klass A upptäcks efter en förvärring av infektionen eller en månad efter dess uppträdande i kroppen. De flesta av dem cirkulerar i våra slemhinnor och endast en femtedel i blodet. De försvinner först efter att alla smittämnen förstörts, det vill säga minst två veckor efter infektionen, högst åtta.

    Om analysen av ELISA efter botemedel visar sin närvaro har sjukdomen gått in i det kroniska stadiet.

    När dekryptering utförs måste du också vara uppmärksam på skylten + och - i formen. Endast en läkare kan fatta en fullständig dom, men vissa funktioner i kroppen kan bedömas på grundval av följande uppgifter:

    Endast en läkare kan fatta en fullständig dom, men vissa funktioner i kroppen kan bedömas på grundval av följande uppgifter:

    • Brist på immunitet mot infektioner indikeras av en sådan kombination av indikatorer som JgM, JgG, JgA med ett minus överallt;
    • Närvaron av immunitet efter ett vaccin eller en infektion indikeras av JgM och JgA med ett minustecken och JgG med ett plustecken (JgG (+));
    • Följande indikatorer kan berätta om förekomsten av akut infektion: JgA (- / +), JgG (- / +) och JgM (+);
    • Vid förvärring av kroniska infektioner kommer formuläret att innehålla följande notering: JgM, JgG och JgA med pluss överallt;
    • Vid kroniska infektioner observeras följande bild: JgG (+/-), JgM (-) och JgA (+/-);
    • JgM (-) indikerar återhämtning.

    En studie såsom en enzymbunden immunosorbentanalys av blodserum utförs också ofta. Det behövs för studier av sköldkörtelhormoner. Indikatorerna för sådana hormoner som tyroxin, fritt tyroxin, triiodotyronin, fritt triiodotyronin och tyroglobulin är viktiga här.

    Dessutom är en sådan studie användbar för diagnos av infektionssjukdomar och autoimmuna sjukdomar..

    ELISA blodprov

    En enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA) utförs för en omfattande bedömning av kroppens skyddande funktioner. Under studien bestäms antalet och egenskaperna hos immunceller, närvaron av de nödvändiga antikropparna. Ett ELISA-blodprov utförs för att diagnostisera smittsamma, hematologiska, autoimmuna sjukdomar, primära och sekundära immunbrister. Tänk på vad som är ett blodprov av ELISA, och vilka indikationer som finns för denna studie.

    Vad det är

    En ELISA är en laboratoriemetod genom vilken antikroppar eller antigener bestäms i ett blodprov. Denna studie används för att detektera nivån av immunglobuliner, immunologiska komplex, hormoner..

    Indikationer för analys

    För utnämningen av ett ELISA-blodprov finns följande indikationer:

    • diagnos av sexuellt överförda infektioner - ureaplasma, mycoplasma, klamydia, trichomonas, syfilis;
    • diagnos av virussjukdomar - cytomegalovirus, herpes, hepatit, Epstein-Barr-virus;
    • bestämning av hormonnivån;
    • diagnos av cancer;
    • bestämning av immunbrist;
    • diagnos av allergier;
    • preoperativ omfattande undersökning före organtransplantation;
    • bedömning av terapins effektivitet.

    Metodprincip

    Principen för enzymimmunoanalysmetoden är baserad på bestämning av specifika antikroppsproteiner i blodet - immunoglobuliner. Immunoglobuliner produceras av det humana immunsystemet när antigener (främmande mikroorganismer) kommer in i kroppen. Sådana immunmolekyler binder till många infektiösa patogener i kroppen och neutraliserar dem..

    Immunoglobuliner har en viktig egenskap - specificitet. På grund av detta kan de binda till ett specifikt antigen och bilda ett antigen-antikroppskomplex. Under ELISA i ett blodprov är det detta komplex som bestäms kvalitativt och kvantitativt.

    Det finns fem klasser av immunglobuliner. Men vanligtvis definieras tre klasser - immunoglobuliner A, M, G. Dessa antikroppar ackumuleras i kroppen vid olika tidpunkter från infektionsögonblicket..

    • Immunglobuliner av klass M (IgM) visas i blodet allra första på den femte dagen från infektionsögonblicket. De är i kroppen i 5-6 veckor och försvinner sedan från blodomloppet. IgM-antikroppar indikerar en akut period av sjukdomen eller en förvärring av sjukdomen under dess kroniska kurs.
    • Cirka 3-4 veckor efter infektionen förekommer klass G-immunglobuliner (IgG) i blodet. De kan existera i blodet hos en person i flera månader eller till och med år. Enligt tolkningen av ELISA av ett blodprov, om två blodprover som tagits i följd efter två veckor har ökat antalet IgG-immunglobuliner, talar de om en aktuell infektion eller återinfektion - återinfektion med samma infektion.
    • Immunglobuliner av klass A (IgA) kan upptäckas med denna testmetod 2–4 veckor efter infektion eller förvärring av en infektionssjukdom. Av dessa cirkulerar endast 20% i blodet, resten är i hemligheten med slemhinnorna. IgA-antikroppar försvinner från blodomloppet 2–8 veckor efter att smittämnena förstörts. Försvinnandet av dessa immunglobuliner betyder ett botemedel mot infektion. Om närvaron av IgA-antikroppar i blodet bestäms efter sjukdomens slut, har sjukdomen gått in i det kroniska stadiet.

    Analysförberedelse

    För analys av blod av ELISA används mänskligt blod ofta. Men du kan också utforska innehållet i glasögon, cerebrospinalvätska och fostervatten.

    Ett blodprov för undersökning tas från patienten från kärnvåren. Det rekommenderas att donera blod på tom mage (minst 12 timmar bör gå från det sista måltidets ögonblick). Det är nödvändigt att informera läkaren om patienten tar mediciner, eftersom några av dem kan ändra resultatet av analysen. Tillförlitligheten hos studiens resultat påverkar användningen av alkohol och droger.

    dekryptering

    Resultatet av denna analys indikerar det positiva (+) eller negativa (-) resultatet av bestämningen av varje klass immunoglobuliner.

    Överväg tolkningen av en eventuell avkodning av ett ELISA-blodprov.

    • Negativt resultat av IgM, IgG, IgA - brist på immunitet mot infektion.
    • Negativt IgM, IgA och IgG-positivt - post-infektiös immunitet eller post-vaccination.
    • Negativ eller positiv IgG, IgA och IgM-positiv - akut infektion.
    • Ett positivt resultat av IgM, IgG, IgA - förvärring av en kronisk infektionssjukdom.
    • Negativt IgM-resultat och negativt eller positivt IgG, IgA-resultat - kronisk infektion.
    • Negativt IgM-resultat och inte bestämt IgG, IgA - återhämtning.

    Metodfördelar

    Ett ELISA-blodprov har många fördelar. De viktigaste kan särskiljas:

    • relativt hög noggrannhet (känslighet);
    • möjligheten till tidig diagnos;
    • förmågan att spåra dynamiken i den smittsamma processen;
    • hög enhetsnivå, vilket möjliggör massscreening;
    • en kort tidsperiod som krävs för att få ett analysresultat;
    • bekvämlighet i arbetet;
    • automatisering av alla analyssteg;
    • relativt låg kostnad.

    nackdelar

    Nackdelen med ELISA-metoden är att den ibland ger falska negativa eller falska positiva resultat. Förutom tekniska fel under studien kan orsaken till falska resultat vara patientens reumatoidfaktor, förekomsten av kroniska sjukdomar (i vilka antikroppar produceras), metaboliska störningar och användningen av vissa mediciner.

    ELISA blodprov för parasiter

    Med hjälp av denna metod bestämmer blodprover förekomsten av följande parasitprocesser i kroppen:

    • ascariasis;
    • trikinos - analysen genomförs flera gånger, den maximala nivån av antikroppar bestäms 4-12 veckor efter infektion;
    • dynt;
    • teniosis;
    • fascioliasis - antikroppar bestäms i det akuta stadiet av sjukdomen;
    • opisthorchiasis - genomföra differentiell diagnos mellan sjukdomens kroniska och akuta form;
    • giardiasis;
    • visceral och kutan leishmaniasis;
    • amöbainfektion;
    • toxoplasmos.

    Ett ELISA-blodprov för parasiter används för att upptäcka antigen (parasiter och deras metaboliska produkter) och antikroppar (immunoglobuliner). Immunoglobuliner produceras i kroppen som antikroppar mot antigener. Specificiteten för denna metod vid bestämning av parasiter är 90%. Med hjälp av denna analys kan du bestämma typen av parasiter, deras antal och på grund av antikropparnas nivå för att spåra dynamiken i processerna.

    Publikationer Om Hjärtrytmen

    Varför är ALT upphöjd, vad betyder det?

    Alaninaminotransferas (ALT) och aspartataminotransferas (AST) är enzymer som är aktiva deltagare i utbytet av aminosyror. De kan vara i cellerna i njurarna, levern, hjärtmusklarna och andra organ.

    Mänskliga blodgrupper: hur de skiljer sig och varför de inte bör blandas

    Om du stoppar en tillfällig förbipasserande på gatan (även om det inte är så lätt att göra nu) och frågar vilken typ av blodtyp han har, kommer han troligen inte att kunna svara på den här frågan.