Vad är ett blodprov för ELISA

Utvecklingen av modern medicin i diagnostikvärlden upphör inte att överraska med sina framsteg, och nu behöver läkaren inte göra antaganden om den troliga diagnosen och förlitar sig bara på indirekta tecken. Genom skapandet och introduktionen till världen av laboratoriestudier av en enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA) kan du snabbt och exakt bestämma inte bara förekomsten av patogen utan också många andra egenskaper hos sjukdomen..

Historik om skapandet och utvecklingen av IFA

Denna metod för blodtestning började användas i praktisk medicin i mitten av förra seklet - någonstans på 60-talet. Det ursprungliga målet var vetenskaplig forskning inom området histologi, som var begränsad till sökning och studie av den biologiska antigenstrukturen hos biologiska arter. Ett ELISA-blodprov är baserat på interaktion mellan besläktade antigener (AH) och specifika antikroppar (AT), med bildningen av ett antigen-antikroppskomplex definierat av enzymet.

Ett sådant fenomen fick forskare att besluta att metoden kan användas för att känna igen proteinföreningar av olika klasser bildade i blodserum när en patogen kommer in i kroppen. På grund av deras direkta engagemang i immunsystemets funktion kallas dessa föreningar immunoglobuliner (IG, Ig), och upptäckten var det största genombrottet i laboratoriediagnostik..

Samtidigt började de aktivt använda denna mycket känsliga metod först på 80-talet, och den var endast tillgänglig i högspecialiserade medicinska institutioner. De allra första som fick möjligheten att använda enzymimmunanalysanalysatorer var stationer och blodtransfusionscentra, venereologiska och infektionsmedicinska institutioner. Detta berodde på den snabba spridningen av "pesten av XX-talet" - AIDS, och det var nödvändigt med akut antagande av diagnostiska och terapeutiska åtgärder..

Metodfunktioner

Omfattningen av blodprovet för ELISA är ganska stort - för tillfället är det omöjligt att föreställa sig hur komplicerat sökandet efter orsakerna till många sjukdomar skulle vara. En sådan studie tillämpas nu i nästan alla medicinska sektorer, även inom onkologi. Även om det är svårt för de oinformerade att förstå, i vissa fall efter att ha utfört det, var det möjligt att rädda patienternas liv genom att upptäcka en tumör i de tidiga stadierna.

I moderna diagnostiska centra presenteras laboratorieundersökningar inte bara av tumörmarkörer - de är utrustade med ett imponerande arsenal av paneler för denna diagnos. Med deras hjälp kan du identifiera många patologiska tillstånd, såsom hormonella avvikelser och smittsamma processer av olika ursprung..

Dessutom kommer genomförandet och avkodningen av ett ELISA-blodprov att göra det möjligt att spåra effekten av läkemedel på kroppen hos en sjuk person och till och med ett djur. Det senare används ofta i veterinärkliniker, vilket hjälper till att upprätthålla hälsan hos våra husdjur eller försörjare, vilket säkerställer ett stabilt utbud av kött, mejeriprodukter och ersättningsbara ägg i kosten.

Således, som ett resultat av insamlingen av bara ett par milliliter venöst blod och dess diagnos av ELISA, kommer läkaren, efter att ha beskrivit forskningsmaterialet, kunna bestämma:

  • hormonellt tillstånd, inklusive biologiskt aktiva ämnen i köns- och sköldkörteln, såväl som binjurarna;
  • förekomsten av bakteriella och virala infektioner (hepatit B och C, syfilis, herpes, klamydia, tuberkulos, myco- och ureaplasmosis, HIV, TORCH) och andra sjukdomar av denna natur;
  • tecken på vital aktivitet hos patogener i den patologiska processen som kulminerade i återhämtning och gick in i stadiet av antikroppsbildning (immunsvar).

Sådana komplex identifieras och elimineras mycket lättare av immunceller. Resteffekter i form av antikroppar hålls i många fall i blodet för livet, vilket praktiskt sett minskar risken för återinfektion till noll.

Typer immunglobuliner

Det finns flera typer av antikroppar, som var och en är involverade i immunsvaret i ett visst skede. Till exempel är klass M-immunglobuliner (IgM) de första som svarar på inträde av AH i kroppen. Deras högsta nivåer observeras under de första dagarna av sjukdomen.

Därefter lanserar immunsystemet klass G IG (IgG) i plasma, ansvarig för fullständig förstörelse av antigen och återhämtning av patienten. Senare fortsätter de att vara i blodet och förbereder därmed immunsystemet för upprepad exponering för en identisk patogen. Enligt denna princip fungerar vaccination. Med introduktionen av försvagade antigener av patologiska mikroorganismer, verkar en hel del immunglobuliner och förblir cirkulerande i plasma.

Och senare, om patogen kontakt inträffar, hanterar de snabbt infektionen och sparar kroppen från ett hot mot hälsan. IgA koncentreras i stora mängder i slemhinnorna, vilket förhindrar inträde av patogena virus och bakterier i kroppen. IgE: er är ansvariga för att döda parasitära infektioner, och det finns många andra immunglobuliner involverade i immunsvaret..

De viktigaste syftena för laboratoriediagnos är Ig-klasserna M, G och A. Med hjälp av deras koncentration kan du bestämma sjukdomens stadium och ta reda på vilka infektionssjukdomar en person har haft i sitt liv. Till exempel kan du kontrollera om det finns historia om vattkoppor eller röda hundar. För att ta reda på om en viss typ av AT eller AH finns i patientens kropp eller koncentrationen av något hormon, behöver läkaren inte förskriva flera laboratorieundersökningar - det räcker för att skriva ut en remiss för ELISA.

Kärnan i metodiken

En enzymbunden immunosorbentanalys för parasiter och andra mikroorganismer som är skadliga för kroppens hälsa gör det möjligt att inte bara fastställa förekomsten av patogener utan också berättar om deras överflöd i patientens blodplasma. En sådan studie tillåter således både kvalitativ och kvantitativ analys av patogena mikroorganismer som finns i serummaterial..

Patogenens koncentrationsnivå påverkar signifikant utvecklingen av infektion och återhämtningsgraden, därför anses en kvalitativ bedömning inte vara mindre viktig än kvantitativ. Hon spelar långt ifrån den sista rollen i behandlingen av barn och vuxna. Men hur visar det sig att IFA lyckas känna igen ett så brett spektrum av mikroorganismer som parasiterar i kroppen hos människor och djur, orsakar skada och minskar livskvaliteten?

Forskningsmetodiken bygger på flera alternativ (direkt och indirekt - konkurrenskraftig och icke-konkurrenskraftig) för att slutföra uppgifterna, var och en är avsedd för specifika ändamål. Detta tillvägagångssätt möjliggör en målinriktad sökning och på kortast möjliga tid att identifiera orsaken till en viss patologi. För att detektera Ig från olika klasskategorier används en 96-brunnarsplatta (polystyrenpanel) och sorberade rekombinanta proteiner finns i dess brunnar. De spelar rollen som antigener, och är i det inledande skedet i den fasta fasen.

Vid inträde i hålet med blodplasma identifierar antigen eller antikroppar objektet i samband med dess orientering och bildar ett komplex (AG - AT). Denna formation fixeras av en enzymatisk förening (konjugat), som därefter manifesteras som en förändrad färgning av hålet. ELISA utförs på specifika testsystem tillverkade i speciallaboratorier och utrustade med ett komplett spektrum av reagens.

Denna analys kan utföras på hus - brickor och lässpektrofometrar, men de kräver manuellt arbete. Naturligtvis är laboratorieassistenten flera gånger bekvämare och snabbare att utföra alla manipulationer på helautomatiska enheter. Vid användning av dem är laboratoriepersonalen undantagna från en stor mängd monoton aktivitet - tvätt, begravning och resten av rutinen, men inte alla medicinska institutioner har råd med så dyra utrustningar

Tolkning av forskningsmaterial är uteslutande behörigheten hos en laboratoriediagnostikspecialist - bara han kan få höra resultaten om specifikationerna och subtiliteten i sjukdomsförloppet. I detta fall måste läkaren nödvändigtvis överväga möjligheten att få falska negativa eller falska positiva svar.

Materialdekryptering

Resultatet av en kvalitativ enzymbunden immunosorbentanalys bör vara en entydig slutsats - den önskade mikroorganismen hittades eller inte i detta blodprov. Kvantitativ analys indikerar koncentrationsnivån och kan uttryckas på två sätt - värdet i antal eller antalet "+" -tecken.

Analyserade indikatorer

I processen, en grundlig studie av de viktigaste immunoglobulinerna som är involverade i immunsvaret, såsom:

  • IgM - detektion av denna klass betyder utveckling av en akut form av en infektionssjukdom. Ett negativt IgM-sökresultat kan vara både bevis på frånvaron av den önskade patogenen och övergången av sjukdomen till en kronisk kurs.
  • IgA - definitionen av denna klass i frånvaro av IgM i de flesta fall, en signal om en kronisk eller latent form av utvecklingen av en infektionssjukdom.
  • IgM och IgA (samtidig närvaro) - positiva resultat för båda arter indikerar toppen av den akuta patologiska formen.
  • IgG - dess närvaro indikerar omvandlingen av sjukdomen till en kronisk form eller återhämtning och bildandet av immunitet mot medlet som bestäms.

Framväxten och ansamlingen av en viss klass av IG inträffar vid olika tidsstadier. Så, till exempel, visas IgM först, ungefär 5 dagar efter det att patogenen kommer in. IG är i blodet i cirka 5-6 veckor och försvinner sedan gradvis. För närvarande är de tillgängliga för bestämning av ELISA. Cirka 3-4 veckor efter sjukdomens början uppträder IgG, som därefter kan vara kvar i flera månader. Men i analysen kan de inte alltid upptäcka.

IgA bildas i blodet under 2-4 veckor, medan 20% av dem finns i serum och 80% - i hemligheten med slemhinnorna. Som regel försvinner dessa immunglobuliner inom 2-9 veckor, vilket indikerar förstörelsen av patogenen och patientens återhämtning. Om ELISA fortfarande visar närvaron av IgA, signalerar detta processens övergång till en kronisk form.

Alternativ för analysresultat

Beroende på erhållna data kan ELISA-svar utfärdas på ett formulär i form av en tabell med en komplett lista över alla antikroppar och hypertoni och en indikation på en positiv eller negativ reaktion. I vissa situationer visas ett kvantitativt värde - ett kraftigt positivt, positivt, svagt positivt eller negativt resultat. Det andra alternativet anger mängden antikroppar i det studerade blodprovet..

Förutom ovanstående värden, i processen med ELISA, studeras en annan kvantitativ parameter - aviditetsindex för AT, beräknat i procent. Det visar hur länge sjukdomen varar - det vill säga ju högre indikator, desto mer tid utvecklas patologin..

En alternativ metod för ELISA

En enzymimmunanalys är en ganska välkänd och vanlig diagnos. Vissa har kanske aldrig hört talas om henne, men det finns en variation av den här studien, som är ännu mindre känd för ett brett spektrum av människor, i vilket ett icke-blodprov tas. Denna teknik kallas avföringsanalys för ockult blod, och i många fall undviker den ytterligare försvagande procedurer, som också åtföljs av obehagliga upplevelser..

Analys av ELISA för ockult blod (hemoglobinmolekyler) gör det möjligt att upptäcka blödning i matsmältningssystemet, till och med en liten, vars tecken inte kan hittas i patientens avföring med blotta ögat. En enzymbunden immunosorbentanalys av ockult blod i mänsklig avföring på kort tid kan visa magsår, polypos, divertikulos, tumörer, som i de tidiga stadierna inte åtföljs av vissa symptom.

Hittills har tusentals olika testsystem för enzymimmunoanalys skapats, vilket ger möjlighet att hitta antikroppar och hypertoni i en enorm lista över patologier. Därför används denna analys i nästan alla grenar av medicin, för alla åldersgrupper. Och absolut oskadlighet gör att du kan ta till dig det under graviditeten och för diagnos av svaga patienter.

ELISA för syfilis

Vad är ELISA för syfilis

ELISA för syfilis - ett prisvärt och mycket informativt test

ELISA är en enzymbunden immunosorbentanalys som används som ett mycket känsligt test vid diagnos av olika patologier, inklusive syfilis. Låter dig identifiera sjukdomen och bestämma dess stadium så exakt som möjligt.

Syfilis uppstår när bakterierna Treponema pallidum (Treponema pallidum) tränger igenom kroppen. Efter 2 till 4 veckor bildas en fast chancre på huden i den lokalisering där introduktionen ägde rum, oftast bildas papulkaraktäristik för syfilis på könsorganen, vilket betyder det initiala stadiet av primär syfilis. När sjukdomen utvecklas förvandlas paplerna till sår och försvinner sedan i de flesta fall, vilket ger patienten ett falskt hopp om självläkning. Men den latenta perioden går in i stadiet för sekundär syfilis, medan treponemas sprids redan över hela kroppen och tränger in i vävnader och organ. Flera utslag bildas på huden och slemhinnorna. Om den inte behandlas börjar nästa steg - tertiär syfilis med bildande av tandkött och skador på centrala nervsystemet, hjärta, benvävnad, mag-tarmkanalen, munhålan och andra organ.

Detektion av antikroppar bekräftar infektion

ELISA bestämmer primär, sekundär, tertiär (oftast bara i det inledande skedet), medfödd, återkommande och latent syfilis. Kärnan i metoden är att upptäcka antikroppar som kroppen producerar som svar på införandet av treponema. I det första stadiet av sjukdomen bildas antikroppar av klass M, efter några veckor är immunglobuliner av klass G fästa vid dem. Koncentrationen av vissa antikroppar varierar beroende på utvecklingsstadiet av syfilis, vilket gör att du kan bestämma sjukdomsstadiet. Vid utförande av ELISA är verkligt treponema blekt eller dess antigen, så testet avser treponemalanalyser.

Fördelar och nackdelar med metoden

Någon forskningsmetod är inte utan brister.

Tidigare användes olika metoder för diagnos av syfilis, såsom: RPHA (passiv hemagglutineringsreaktion), RW (Wasserman-reaktion), MR (utfällningsmikroreaktion), RSK (komplementbindningsreaktion) och andra test. Olika analyser som screeningtester och bristen på ett enhetligt system ledde ofta till förvirring, och till följd av negativa konsekvenser, till exempel när en givare med ett falskt negativt resultat blev en mellanhand i infektionen av mottagare. Sedan 2006 har tester blivit mer standardiserade, ELISA erkändes som en av de mest effektiva diagnostiska metoderna och används för närvarande som ett verifieringstest när ett positivt resultat av icke-treponemal analys upptäcks..

Nontreponemal test är screeningtester.

Nu används icke-treponemala analyser för att identifiera möjlig syfilisinfektion i alla befolkningsgrupper, det vill säga de är screeningtester. Med ett tveksamt eller positivt resultat föreskrivs en IFA eller annan treponemal analys. ELISA har blivit ett av de ledande testerna för syfilis på grund av dess fördelar:

  • hög känslighet för att detektera antikroppar mot treponem i en mycket låg koncentration;
  • hög specificitet uppnås genom användning av bleka treponema-antigener;
  • objektivitet av resultat på grund av automatisk redovisning;
  • enkel inställning av reaktionen utförs tack vare en komplett uppsättning uppsättningar för diagnos;
  • testets universalitet: kan användas för förebyggande undersökning av befolkningen, för diagnos av alla stadier av sjukdomen och verifiering av tveksamma resultat.

Antikroppar mot Treponema pallidum liknar vissa typer av immunglobuliner som bildats under andra typer av infektioner, därför, trots ELISAs specificitet, kan falska positiva resultat detekteras i små mängder. En annan nackdel med ELISA är att när sjukdomen utvecklas minskar antalet antikroppar, vilket kan leda till ett falskt negativt resultat..

Indikationer för studien.

Graviditetsperiod - indikation för analys

ELISA utförs som ett bekräftande test efter icke-repetemal analys, men kan också fungera som en screeningsanalys. Utnämnd i följande fall:

  • schemalagd test vid ansökan om vissa typer av arbete;
  • rutinidentifiering av infektionsrisker;
  • sjukhusvistelse, preoperativ period;
  • donation;
  • graviditet;
  • screening för syfilis symptom.

Syfilis kan misstänkas av ett specifikt tecken - bildning av en hård chancre, samt smärta i leder och ben, svullnad i könsorganen, en ökning av kroppstemperaturen till 38 ° C och en ökning av lymfkörtlar. Som profylax rekommenderas att man regelbundet genomgår en studie med ett aktivt sexliv med partnerbyte.

Studieförberedelse

Under en feberperiod bör du avstå från testet.

För att minimera risken för att få ett falskt resultat bör du följa reglerna.

  1. Ett blodprov ges på tom mage, beroende på laboratoriet bör hungerperioden vara från 4 till 12 timmar.
  2. Den föregående dagen utesluter alkohol och fet mat, rökning är begränsad minst en timme före studien.
  3. Inför analysen kan du bara dricka rent vatten, det är inte tillåtet att använda juice, kaffe, droger.
  4. Alla andra studier och medicinska procedurer utförs efter godkänt test..
  5. Du bör inte testas om det förekommit feber under de föregående dagarna eller om vaccination gavs..
  6. Kvinnor rekommenderas inte att ta ett test under menstruationen..

Avkryptering av resultaten

Ett positivt resultat indikerar förekomsten av ett virus

  • närvaron av treponema blek infektion;
  • falskt positivt resultat i närvaro av andra faktorer;
  • effekter av tidigare behandlad syfilis.
  • brist på infektion;
  • inkubering (tidig primär) period av syfilis;
  • sen period, inklusive sena utvecklingsstadier av tertiär syfilis.

Falskt positivt resultat och dess orsaker

Falskt positivt test kan vara för diabetes

Treponema pallidum är en spirochete som innehåller 42 genfamiljer, varav 17% liknar proteiner från andra typer av bakterier, vilket i ett litet antal fall provoserar ett positivt resultat i närvaro av infektion av andra mikroorganismer. Till exempel, med ett antal autoimmuna sjukdomar, detekteras antifosfolipidantikroppar liknande de för syfilis. I början av 2000-talet konstaterades att skillnaden mellan antikroppar i detta fall är en beroendefaktor, vid autoimmuna sjukdomar är antikroppar beroende av p2-glykoprotein-1 och i syfilis är de inte beroende. Men hittills förblir frågan om förekomsten av falska positiva reaktioner öppen, eftersom orsaken till sådana resultat inte alltid är uppenbar.

Enligt statistik manifesteras oftast falska positiva resultat i följande fall:

  • hepatit;
  • spetälska;
  • hjärtinfarkt;
  • berusning;
  • bindvävssjukdomar;
  • autoimmuna patologier;
  • diabetes;
  • graviditet;
  • menstruationsperiod;
  • period efter vaccination.

Treponema har likheter med andra patogener

Treponema pallidum är inte den enda arter av trepan, andra spirochetes inkluderar patogena patogener: Treponema pertenue (orsakande agens av java), Treponema bejel (orsakande agens av bejel), Treponema carateum (orsakssubstans för pint) och många andra. Vid mikroskopisk undersökning skiljer de sig lite från blekt treponem, och antikroppar mot dem liknar immunoglobuliner i syfilis.

Ett positivt resultat kan återspegla förekomsten av sjukdomen tidigare, eftersom immunglobuliner i klass G kan stanna i blodomloppet i flera år.

Falskt negativt resultat och dess orsaker.

Under inkubationsperioden kan resultatet bli negativt

I det första stadiet av sjukdomen visar ELISA ett negativt resultat, denna period är inkubation, när primär syfilis ännu inte har inträffat, och det inte finns några karakteristiska tecken på sjukdomen. Inkubationsperioden jämfört med data om syfilisinfektion i mitten av 1900-talet ökade med 7-10 dagar, för närvarande är det cirka 3 veckor. Detta innebär att efter penetrering av treponema i kroppen upptäcks ett falskt negativt resultat i tre, och ibland fler, veckor.

I avsaknad av terapi utvecklas tertiär syfilis vanligtvis efter 3 till 5 år från infektionsögonblicket, i vissa fall kan sjukdomen uppstå efter 10 till 15 år mot bakgrund av en asymptomatisk kurs och övergången av syfilis från ett steg till ett annat. Vid denna tidpunkt är antalet antikroppar avsevärt reducerat eller de är helt frånvarande, vilket leder till ett falskt negativt resultat. Enligt vissa rapporter kan olika infektionssjukdomar, diabetes mellitus och användning av vissa antibiotika påverka det felaktiga resultatet..

ELISA blodprov

En enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA) utförs för en omfattande bedömning av kroppens skyddande funktioner. Under studien bestäms antalet och egenskaperna hos immunceller, närvaron av de nödvändiga antikropparna. Ett ELISA-blodprov utförs för att diagnostisera smittsamma, hematologiska, autoimmuna sjukdomar, primära och sekundära immunbrister. Tänk på vad som är ett blodprov av ELISA, och vilka indikationer som finns för denna studie.

Vad det är

En ELISA är en laboratoriemetod genom vilken antikroppar eller antigener bestäms i ett blodprov. Denna studie används för att detektera nivån av immunglobuliner, immunologiska komplex, hormoner..

Indikationer för analys

För utnämningen av ett ELISA-blodprov finns följande indikationer:

  • diagnos av sexuellt överförda infektioner - ureaplasma, mycoplasma, klamydia, trichomonas, syfilis;
  • diagnos av virussjukdomar - cytomegalovirus, herpes, hepatit, Epstein-Barr-virus;
  • bestämning av hormonnivån;
  • diagnos av cancer;
  • bestämning av immunbrist;
  • diagnos av allergier;
  • preoperativ omfattande undersökning före organtransplantation;
  • bedömning av terapins effektivitet.

Metodprincip

Principen för enzymimmunoanalysmetoden är baserad på bestämning av specifika antikroppsproteiner i blodet - immunoglobuliner. Immunoglobuliner produceras av det humana immunsystemet när antigener (främmande mikroorganismer) kommer in i kroppen. Sådana immunmolekyler binder till många infektiösa patogener i kroppen och neutraliserar dem..

Immunoglobuliner har en viktig egenskap - specificitet. På grund av detta kan de binda till ett specifikt antigen och bilda ett antigen-antikroppskomplex. Under ELISA i ett blodprov är det detta komplex som bestäms kvalitativt och kvantitativt.

Det finns fem klasser av immunglobuliner. Men vanligtvis definieras tre klasser - immunoglobuliner A, M, G. Dessa antikroppar ackumuleras i kroppen vid olika tidpunkter från infektionsögonblicket..

  • Immunglobuliner av klass M (IgM) visas i blodet allra första på den femte dagen från infektionsögonblicket. De är i kroppen i 5-6 veckor och försvinner sedan från blodomloppet. IgM-antikroppar indikerar en akut period av sjukdomen eller en förvärring av sjukdomen under dess kroniska kurs.
  • Cirka 3-4 veckor efter infektionen förekommer klass G-immunglobuliner (IgG) i blodet. De kan existera i blodet hos en person i flera månader eller till och med år. Enligt tolkningen av ELISA av ett blodprov, om två blodprover som tagits i följd efter två veckor har ökat antalet IgG-immunglobuliner, talar de om en aktuell infektion eller återinfektion - återinfektion med samma infektion.
  • Immunglobuliner av klass A (IgA) kan upptäckas med denna testmetod 2–4 veckor efter infektion eller förvärring av en infektionssjukdom. Av dessa cirkulerar endast 20% i blodet, resten är i hemligheten med slemhinnorna. IgA-antikroppar försvinner från blodomloppet 2–8 veckor efter att smittämnena förstörts. Försvinnandet av dessa immunglobuliner betyder ett botemedel mot infektion. Om närvaron av IgA-antikroppar i blodet bestäms efter sjukdomens slut, har sjukdomen gått in i det kroniska stadiet.

Analysförberedelse

För analys av blod av ELISA används mänskligt blod ofta. Men du kan också utforska innehållet i glasögon, cerebrospinalvätska och fostervatten.

Ett blodprov för undersökning tas från patienten från kärnvåren. Det rekommenderas att donera blod på tom mage (minst 12 timmar bör gå från det sista måltidets ögonblick). Det är nödvändigt att informera läkaren om patienten tar mediciner, eftersom några av dem kan ändra resultatet av analysen. Tillförlitligheten hos studiens resultat påverkar användningen av alkohol och droger.

dekryptering

Resultatet av denna analys indikerar det positiva (+) eller negativa (-) resultatet av bestämningen av varje klass immunoglobuliner.

Överväg tolkningen av en eventuell avkodning av ett ELISA-blodprov.

  • Negativt resultat av IgM, IgG, IgA - brist på immunitet mot infektion.
  • Negativt IgM, IgA och IgG-positivt - post-infektiös immunitet eller post-vaccination.
  • Negativ eller positiv IgG, IgA och IgM-positiv - akut infektion.
  • Ett positivt resultat av IgM, IgG, IgA - förvärring av en kronisk infektionssjukdom.
  • Negativt IgM-resultat och negativt eller positivt IgG, IgA-resultat - kronisk infektion.
  • Negativt IgM-resultat och inte bestämt IgG, IgA - återhämtning.

Metodfördelar

Ett ELISA-blodprov har många fördelar. De viktigaste kan särskiljas:

  • relativt hög noggrannhet (känslighet);
  • möjligheten till tidig diagnos;
  • förmågan att spåra dynamiken i den smittsamma processen;
  • hög enhetsnivå, vilket möjliggör massscreening;
  • en kort tidsperiod som krävs för att få ett analysresultat;
  • bekvämlighet i arbetet;
  • automatisering av alla analyssteg;
  • relativt låg kostnad.

nackdelar

Nackdelen med ELISA-metoden är att den ibland ger falska negativa eller falska positiva resultat. Förutom tekniska fel under studien kan orsaken till falska resultat vara patientens reumatoidfaktor, förekomsten av kroniska sjukdomar (i vilka antikroppar produceras), metaboliska störningar och användningen av vissa mediciner.

ELISA blodprov för parasiter

Med hjälp av denna metod bestämmer blodprover förekomsten av följande parasitprocesser i kroppen:

  • ascariasis;
  • trikinos - analysen genomförs flera gånger, den maximala nivån av antikroppar bestäms 4-12 veckor efter infektion;
  • dynt;
  • teniosis;
  • fascioliasis - antikroppar bestäms i det akuta stadiet av sjukdomen;
  • opisthorchiasis - genomföra differentiell diagnos mellan sjukdomens kroniska och akuta form;
  • giardiasis;
  • visceral och kutan leishmaniasis;
  • amöbainfektion;
  • toxoplasmos.

Ett ELISA-blodprov för parasiter används för att upptäcka antigen (parasiter och deras metaboliska produkter) och antikroppar (immunoglobuliner). Immunoglobuliner produceras i kroppen som antikroppar mot antigener. Specificiteten för denna metod vid bestämning av parasiter är 90%. Med hjälp av denna analys kan du bestämma typen av parasiter, deras antal och på grund av antikropparnas nivå för att spåra dynamiken i processerna.

Beskrivning av diagnosen STD: enzymimmunanalys (ELISA)

Listan över tillgängliga diagnostiska metoder har expanderat snabbt under de senaste decennierna, diagnostiker försöker kombinera fördelarna med alla tidigare analyser i nya metoder, och avlägsna alla sina tidigare brister.

Nyligen, oftare i listan över diagnostiska förfaranden, förekommer enzymbunden immunosorbentanalys - ett modernt och ganska nytt test, som är lite känt för en vanlig person som inte är kopplad till medicin. Ändå expanderar denna teknik snabbt sina anhängare bland kvalificerad medicinsk personal. Vad det är och i vilka fall det ska användas kan du försöka ta reda på det genom att titta på dess funktioner och huvudegenskaper.

Kärnan i metoden

En enzymbunden immunosorbentanalys är en instrumentell laboratorieteknik baserad på den molekylära antigen-antikroppsreaktionen, som möjliggör detektion av specifika proteiner i biologiska material (prover för forskning). Sådana proteiner kan vara enzymer, en mängd olika mikroorganismer (virus, bakterier, svampar), protoso, etc..

Efter upptäckten av metoden fick han namnet ELISA-test, som inte är relaterat till upptäckarnas namn, men är en förkortning av det fullständiga namnet i den engelska versionen - enzymbunden immunosorbentanalys. Läkare runt om i världen använder detta namn, vissa läkare i rysktalande länder kallar också denna typ av forskning.

Den grundläggande principen för metoden är molekylreaktionen antigen-antikropp.

Ett antigen är vilken främmande molekyl som kommer in i människokroppen som en del av en patogenmikrobe. Antigener är vanligtvis proteinmolekyler. Förutom mikroorganismer kan sådana "främlingar" vara celler av främmande blod som inte sammanfaller i grupp eller Rh-faktor.

Som svar på intaget av ett sådant antigen startas en immunreaktion i kroppen som syftar till att skydda mot eventuella främmande molekyler. Detta inträffar på grund av syntesen av speciella medel i immunsystemet - antikroppar (immunoglobuliner). Varje antikropp är endast lämplig för ett specifikt antigen och neutraliserar den patogena "främmande" genom att bringa den i kontakt med ett enda komplex. Det är processen med sådan bindning som kallas antigen-antikroppsreaktionen.

Typer av antikroppar

Alla antikroppar (immunoglobuliner) är indelade i 5 typer beroende på vilket stadium av immunresponsen de förekommer:

  • Klass M (IgM). En kraftig ökning av sådana immunglobuliner observeras inom de första dagarna efter införandet av en infektion eller annat patogent medel. Efter cirka 6 veckor börjar de upplösa sig och försvinna..
  • Klass G (IgG). Syntetiserades i det andra steget för att övervinna sjukdomen. Efter fullständig eliminering av främmande molekyler fortsätter de att vara närvarande i blodet i en liten mängd för att ge immunitet vid återinfektion.
  • Klass A (IgA). Sådana immunoglobuliner är ansvariga för de skyddande funktionerna i slemhinnorna i kroppen, genom vilka patogena element lättare tränger igenom, eftersom slemhinnan är mycket tunnare och mer mjuk än vanliga hudintegument..
  • Klass E (IgE). Dessa specifika globuliner riktar sina åtgärder mot parasitinfektioner som påverkar människokroppen. De förekommer oavsett vilket organsystem som påverkas av parasiter..
  • Klass D (IgD). Denna klass finns alltid även hos friska människor. Hos barn under 10 år ökar det gradvis, varefter mängden, med förbehåll för absolut hälsa, inte förändras. Om indikatorn ökar över det normala kan det indikera en graviditet, astma, immunbrist osv..

För ELISA-diagnostik är IgG-, IgM- och IgA-nivåer av immunglobuliner viktigast. Enligt deras poäng kan du ta reda på om en person har haft en sjukdom tidigare eller har drabbats av nyligen, har utvecklat immunitet eller är hans kropp försvarslös mot patologi.

Fördelar och nackdelar med enzymimmunanalys

Just nu är ELISA en av de mest exakta och känsliga metoderna. Det har antagits av specialister inom olika medicinområden och fortsätter att utöka sitt omfattning..

Metodfördelar

  • Hög noggrannhet för data.
  • Känslighet (gör att du kan upptäcka det nödvändiga ämnet även med en minimal närvaro av patogen i provet).
  • Möjligheten att diagnostisera under de första dagarna av sjukdomen eller under inkubationsperioden.
  • Hastigheten för datainsamling jämfört med andra metoder med liknande noggrannhet.
  • Hög automatisering av processen och minimalt mänskligt engagemang, vilket minskar utförarens noggrannhet.
  • Skaffa data om scenen i den patologiska processen och effektiviteten hos den valda terapin.
  • Smärtslös och låg invasivitet när du väljer material.

Nackdelar med metoden

  • I de flesta fall kan du bestämma kroppens svar på ett patogent medel, och inte själva patogenet.
  • Innan studien måste den påstådda sjukdomen vara exakt känd, eftersom testet är mycket specifikt..
  • Sannolikheten för falska indikatorer orsakade av tekniska problem, att ta mediciner, samtidigt förekomsten av flera kroniska sjukdomar eller metaboliska störningar i patientens kropp.
  • Tolkning av resultaten bör endast göras av en högt kvalificerad specialist, eftersom det för tolkningen av de erhållna uppgifterna är nödvändigt att ha specialutbildning och ett stort lager av medicinsk kunskap inom ett visst område.
  • ELISA är en ganska sällsynt analys, därför utförs den inte i alla diagnostiska laboratorier.
  • Metoden är ganska dyr, eftersom laboratoriet förutom reagens måste ha dyrbar mängd utrustning och prov av antigen som produceras i specialinstitut.

I vilka fall använder man enzymimmunanalys

Den fullständiga listan över indikationer för utnämning av en enzymimmunoanalys är mycket bred, den innehåller nästan alla grenar av medicin.

Oftast används IFA för sådana ändamål:

  • upptäckt av infektionssjukdomar;
  • diagnos av sexuellt överförda sjukdomar;
  • bestämning av immunstatus eller individuella autoimmuna sjukdomar;
  • identifiering av tumörmarkörer;
  • hormonbestämning.

När det gäller infektionssjukdomar och virussjukdomar tillåter tekniken att identifiera följande patologier:

  • alla typer av viral hepatit;
  • Epstein-Barr-virus;
  • alla TORCH-infektioner;
  • alla typer av tarminfektioner;
  • HIV
  • syfilis;
  • mest parasitinfektioner;
  • Helicobacteriosis, etc..

Dessutom låter ELISA dig snabbt och effektivt bestämma en hjärtattack, utvärdera reproduktionspotentialen i kroppen, identifiera allergier, dess källa, etc..

En enzymbunden immunosorbentanalys används för att utföra kliniska prövningar under utvecklingen av nya läkemedel och för att bedöma deras effekt på människokroppen..

Typer av prover och metoder för val av dem för forskning

Oftast är det studerade materialet för enzymbunden immunosorbentanalys blod, som tas från patientens ulnarven. Provtagning utförs på tom mage, främst på morgonen. Efter valet från blodet separeras och avlägsnas de formade celler som stör studien och lämnar endast serum.

Vid diagnostisering av genitourinära infektioner är materialet ofta utstryk från slemvävnaderna i könsorganen, slem från urinröret eller livmoderhalsen, prov från rektum, skrotningar från erosion eller sår i ljumsken och andra delar av kroppen. Utstryk kan tas från munhålan såväl som från nasopharynx.

Ibland används en enzymimmunanalys i obstetrisk och gynekologisk praxis under graviditet för att bestämma läkemedlets fostervatten. I detta fall blir fostervattnet ett prov. För detta tas en liten mängd vätska som genomtränger fostrets urinblåsan med en lång nål. All manipulation utförs med ett sterilt instrument för att minimera möjliga risker..

Ofta blir materialet cerebrospinalvätska eller serös vätska. Detta inträffar med lokalbedövning, som injiceras..

Förklara vilken typ av material som är nödvändig för enzymbunden immunosorbentanalys, om en specialist som leder studien. Ofta tas flera typer av prov samtidigt eller från olika platser. En läkare som lämnar en remiss för denna typ av undersökning bör också berätta för patienten om förberedelserna för leverans av biomaterial.

Beredning för enzymimmunanalys

För att öka noggrannheten hos de data som erhållits efter en enzymimmunanalys bör förberedelsen för val av material vara följande:

  • 10 dagar före studien utesluter antibiotika, antivirala och antimykotiska läkemedel;
  • per dag är det nödvändigt att utesluta alkohol, röka och ta narkotiska ämnen;
  • under samma period är det nödvändigt att undvika fysisk överbelastning;
  • att varna den receptbelagda specialisten om alla läkemedel som patienten tar;
  • meddela en läkare vid graviditet eller misstänkt graviditet.

Bäst om testmaterial väljs på tom mage på morgonen..

Om diagnosen syftar till att bestämma tillståndet för den hormonella bakgrunden är det viktigt att säkerställa ett lugnt tillstånd på kvällen och undvika nervspänningar. För kvinnor bestäms bloddonation för hormoner tydligt av perioden för månadscykeln, vilket kommer att sägas av läkaren vid tidpunkten för utnämningen..

2-3 dagar innan materialvalet är det nödvändigt att utesluta stekt och fett från menyn, och innan analys för hepatit äter inte citrusfrukter och andra frukter och grönsaker i orange och gult.

Avkodning av resultaten av enzymimmunanalys

Resultatet av en kvalitativ studie indikeras vanligtvis med tecknen "+" (hittat) eller "-" (inte hittat).

Närvaron eller frånvaron av vissa grupper immunglobuliner kan dra följande slutsatser:

  • JgM (-), JgG (-), JgA (-) - immunsystemet mot sjukdomen är helt frånvarande (kroppen har inte tidigare stött på denna typ av antigen);
  • JgM (-), JgG (+), JgA (-) - tidigare var det en kollision med detta antigen eller vaccin;
  • JgM (+), JgG (- / +), JgA (- / +) - akut patologisk process (troligen primär);
  • JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - processen för en kronisk kurs;
  • JgM (+), JgG (+), JgA (+) - återfall;
  • JgM (-) - återhämtningssteg.

Kvantitativa värden har en stor informationsbelastning, men bara den behandlande läkaren kan tolka dem baserat på tidigare indikationer, patientålder och normer för varje specifik sjukdom. Det är därför du inte kan utvärdera resultaten själv..

Hur lång tid väntar på resultaten

Denna teknik har många sorter, beroende på vilken period för mottagande av data för hand bestäms. Den genomsnittliga varaktigheten för ELISA-diagnos är 4-6 timmar, vilket gör att du kan ge resultat redan nästa dag.

De längsta metoderna tar upp till tio dagar, till exempel i fall av HIV-infektion.

Vid akut behov är användningen av expressmetoder möjlig, där svaret mottas efter 1-2 timmar.

Var kan jag få ett IFA-test?

Eftersom utrustningen för att utföra denna typ av diagnos är ganska dyr kan inte alla laboratorier köpa den. Dessutom har tester som innehåller specifika antigener en begränsad lagringstid (vanligtvis cirka 1 år), så de behöver ständigt uppdateras..

Av dessa skäl finns det långt ifrån alltid IFA-laboratorier i statliga medicinska institutioner. Oftast måste du kontakta stora privata medicinska eller stora diagnoscentra.

För att genomföra en IFA-studie måste laboratoriet ha en särskild licens och personal- och laboratorieassistenter måste genomgå specialutbildning.

Oftast rekommenderas ett specifikt diagnoscenter eller laboratorium av läkaren som hänvisar patienten för undersökning.

Enzymimmunanalys

Priset för denna studie beror på landets region och nivån på kliniken som tillhandahåller tjänsten. I Moskva börjar minimipriset för bestämning av ett antigen på 700 rubel. Om det är nödvändigt att identifiera flera immunglobuliner samtidigt, kommer priset att sammanfattas.

Vid akut analys ökar kostnaden med 150-200 rubel. för varje antigen.

Trots de relativt höga kostnaderna, med en enzymbunden immunosorbentanalys kan du göra patientundersökningen så informativ och snabb som möjligt, vilket minskar tiden före behandlingen och gör att du snabbt kan stabilisera en persons tillstånd.

Den här videon presenterar filmen "Fundamentals of enzym-linked immunosorbent assay".

Enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA, ELISA). Kärnan, metodens princip och studiens stadier. Analys för antikroppar, klasser av antikroppar, immunkomplex.

I samband med utvecklingen av cellteknologier, molekylärbiologi, genetik, fysik, kemi och ett antal andra högteknologiska discipliner införs nya högprecisions- och högteknologiska metoder i vardagen. Dessa tvärvetenskapliga trender påverkar både området medicinsk kunskap och relaterade områden av biologiska, biokemiska problem. Under de senaste tio åren har en metod för klinisk laboratoriediagnostik som kallas enzymimmunoanalys blivit utbredd och införts i masspraxis..

I allmänhet har teknologier för immunologiska enzymatiska och radiologiska reaktioner använts i stor utsträckning för att skriva celler, cellkulturer, olika vävnader sedan början av 80-talet av XX-talet. Dessa metoder var emellertid mycket tidskrävande, inte enhetliga, inte standardiserade, vilket utesluter deras användning i terapeutiska och diagnostiska syften i hopkall. Endast smala, högteknologiska och högspecialiserade laboratorier använde dessa metoder..

Men med utvecklingen av teknik, mikroteknologi och produktion av olika biopolymermaterial blev det möjligt att producera färdiga uppsättningar av enzymimmunoanalysdiagnostik, som kan användas av laboratorier för medicinska institutioner med en bred profil. ELISA används ofta för att diagnostisera alla typer av infektioner (klamydia, syfilis, cytomegalovirus, toxoplasmos, herpes, etc.), både akuta och kroniska, såväl som latenta former som förekommer utan kliniska symptom. Denna metod används också för att kontrollera kroniska sjukdomar. Låt oss försöka ta reda på vad den här metoden är och vilka principer som ligger till grund för den.?

Enzymbundna immunosorbentanalyskomponenter - immunsvar och enzymatisk reaktion

Vad är ett immunsvar? Vad är en antikropp, antigen?

Vad är ett immunsvar? Vad är antigen??
Först av allt kommer vi att analysera vad immunreaktioner är. Immunreaktioner är specifika reaktioner för bindning av ett antigen till en antikropp för att bilda ett immunkomplex. Vad betyder det? På ytan på varje cell i vilken organisme som helst, finns det speciella strukturer som kallas antigener. Antigener i allmänhet är molekyler som innehåller information om en cell (liknande information om en persons märke, vilket indikerar grunddata från den personen).

Individuella och arter antigener - vad är det? Varför behövs dessa antigener??

Det finns enskilda antigener, det vill säga bara inneboende för denna speciella organisme. Dessa individuella antigener är olika för alla människor, det liknar varandra, men fortfarande olika. Två identiska kopior av enskilda antigener finns inte i naturen!

Den andra huvudtypen av antigener är artantigener, det vill säga inneboende i en viss typ av levande varelse. Till exempel har en person sitt eget artantigen som är gemensamt för alla människor, möss har sina egna musarterantigen, etc. På ytan av varje cell är ett specifikt och individuellt antigen nödvändigtvis närvarande.

Arten antigen används av celler i immunsystemet för att identifiera "vän eller fiende".

Hur antigenigenkänning sker?

En immuncell binder till en misstänkt cell och identifierar en individuell antigen. I immuncells minne är det "inspelat" hur "dess antigen" ser ut. Om antigenen i en misstänkt cell sammanfaller med beskrivningen av "dess antigen" utgör inte denna cell av sin egen organisme en fara. Sedan "förband immuncellen" och lämnar. Och om antigenet inte sammanfaller med beskrivningen av "vår", identifierar immuncellen denna cell som "främmande", vilket betyder att den är potentiellt farlig för hela organismen. I det här fallet "lossar inte immuncellen" utan börjar förstöra det farliga föremålet. Noggrannheten hos sådant immunologiskt erkännande är fantastiskt - 99,97%. Det finns praktiskt taget inga fel!

Vad är en antikropp, immunkomplex?
Och vad är en antikropp?

En antikropp är en speciell molekyl som ligger på ytan av en immuncell. Det är antikroppen som binder till antigenerna i den misstänkta cellen. Vidare överför antikroppen information till cellen där igenkänningen sker och mottar en retursignal för två typer av "egen" eller "främmande". När signalen "egen" antikropp förstör anslutningen med antigenet och frigör cellen.

Vad är immunkomplexet?
När signalen är "främmande" utvecklas situationen annorlunda. Antikroppen bryter inte förbindelsen med antigenet utan snarare skickar specifika signaler "förstärkning". Biologiskt betyder detta att andra antikroppar som finns i en annan del av cellen börjar flytta till det område där farosignalen kommer från, och också bildar en koppling mellan sig själva och det fångade antigenet. I slutändan verkar antigenet vara omgivet på alla sidor och fast bundet. Ett sådant antigen + antikroppskomplex kallas immunkomplexet. Från detta ögonblick börjar antigenanvändning. Men nu är vi inte intresserade av detaljerna om antigenneutraliseringsprocessen..

Typer av antikroppar (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Antikroppar är proteinstrukturer som följaktligen har ett kemiskt namn, som används som synonym för ordet antikroppar. Så antikroppar = immunglobuliner.

Det finns 5 typer av immunglobuliner (Ig) som binder till olika typer av antigen på olika platser i människokroppen (till exempel på huden, på slemhinnorna, i blodet etc.). Det vill säga antikroppar har en arbetsdelning. Dessa immunoglobuliner kallas bokstäver i det latinska alfabetet - A, M, G, D, E och betecknas på följande sätt - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

Vid diagnos används endast en typ av antikropp, som är den mest specifika med avseende på mikroben som bestäms. Det vill säga, bindningen av denna typ av antikropp till det detekterade antigenet sker alltid. Vanligtvis används IgG och IgM.

Det är denna princip om immunresponsen (den unika noggrannheten och specificiteten för igenkänning av ett definierat biologiskt objekt) som ligger till grund för enzymimmunanalysen. På grund av antikropparnas höga noggrannhet i igenkänningen av antigener, är noggrannheten för hela enzymimmunoanalysen också den högsta..

Enzymatisk reaktion

Vad är en enzymatisk reaktion? Vad är affinitet, substrat och reaktionsprodukt?
Vi fortsätter att överväga den enzymatiska reaktionen i metoden för enzymimmunanalys.

Vad är en enzymatisk reaktion?

En enzymatisk reaktion är en kemisk reaktion där en substans omvandlas till en annan genom verkan av ett enzym. Det ämne som enzymet verkar på kallas ett substrat. Och ämnet som erhålls som ett resultat av enzymets verkan kallas reaktionsprodukten. Dessutom är det speciella med den enzymatiska reaktionen sådan att ett visst enzym endast verkar på ett visst substrat. Denna egenskap hos ett enzym för att känna igen ”dess” substrat kallas affinitet..

Således utför varje enzym endast en reaktion som är specifik för den. Många enzymer är kända i den biologiska världen såväl som enzymatiska reaktioner. Vid enzymimmunanalys används endast ett fåtal enzymatiska reaktioner - högst 10. Samtidigt valdes enzymatiska reaktioner vars produkt är färgade ämnen. Varför ska produkterna från den enzymatiska reaktionen färgas? För att beräkna koncentrationen av ett ämne från en färgad lösning finns det en enkel kemisk metod - kolorimetri.

Colorimetry-metod - essensen och principen

Colorimetry använder en mätning av färgtätheten för en lösning, och koncentrationen av ett ämne beräknas utifrån färgtätheten. Vid kolorimetri är två varianter av beroende av färgdensitet av koncentrationen av ett ämne möjliga - detta är ett direkt proportionellt beroende eller omvänt proportionellt beroende. Med ett direkt proportionellt beroende, desto högre koncentration av ämnet, desto intensivare är färgtätheten för lösningen. När det är omvänt proportionellt, desto högre koncentration av ämnet, desto lägre är tätheten för färgens färg. Tekniskt händer detta enligt följande: flera lösningar med en känd koncentration av ett ämne tas, dessa lösningers densitet mäts, en graf över koncentrationen kontra färgdensitet konstrueras (kalibreringsgraf).

Mät sedan färgtätheten på lösningen, vars koncentration bestäms, och från kalibreringsgrafen hittar du koncentrationsvärdet som motsvarar nivån på den uppmätta densiteten för lösningens färg. I moderna automatiska färgmätare kalibrerar de bara en gång, sedan konstruerar enheten själv en kalibreringskurva som finns kvar i enhetens minne och mätningen händer automatiskt.

I enzymimmunoanalysen används följande enzymer oftast: peroxidas, alkaliskt fosfatas, avidin.

Hur kombineras immunologiska och enzymatiska reaktioner i en enzymimmunoanalys? Nu kommer vi att undersöka själva enzymbunden immunosorbentanalys. Vilka stadier inkluderar det och vad händer under dessa reaktioner? Enzymbunden immunosorbentanalys är direkt och indirekt.

Enzymbunden immunosorbentanalys - stadier

I en direkt enzymbunden immunosorbentanalys används antikroppar mot ett detekterbart antigen kopplat till en specifik märkning. Denna specifika etikett är substratet för den enzymatiska reaktionen..

Fästningen av antigener till hålets yta och anslutningen av antigen med antikropp

Hur utförs direkt enzymimmunanalys? Biologiskt material tas (blod, skrapningar från slemhinnor, utstryk) och placeras i speciella hål. Biologiskt material lämnas i brunnarna i 15-30 minuter så att antigenerna kan fästa vid ytan på brunnarna. Därefter tillsätts antikroppar mot det detekterbara antigenet till dessa brunnar. Detta innebär att vid detektering av antigener, till exempel syfilis, tillsätts antikroppar mot syfilisantigener. Dessa antikroppar erhålls industriellt och laboratorier köper färdiga satser. Denna blandning av testmaterialet och antikropparna lämnas under en tid (från 30 minuter till 4-5 timmar) så att antikropparna kan hitta och kontakta sitt ”egna” antigen. ett prov av antigener, desto fler antikroppar kommer att kontakta dem.

Borttagning av "överskott" antikroppar

Såsom indikerats är antikroppar också associerade med en specifik märkning. Eftersom antikroppar tillsätts i överflöd kommer inte alla att binda till antigen, och om det inte finns något antigen i provet, kommer följaktligen ingen antikropp att binda till det önskade antigenet. För att avlägsna de "extra" antikropparna hälls innehållet i brunnarna helt enkelt. Som ett resultat av detta avlägsnas alla "extra" antikroppar, och de som binder till antigenen kvarstår, eftersom antigenen "limmas" på ytan av brunnarna. Brunnarna sköljs flera gånger med en speciell lösning som låter dig tvätta alla "extra" antikroppar.

Enzymatisk reaktion - bildning av en färgad förening

Därefter börjar det andra steget - en enzymatisk reaktion. En enzymlösning tillsättes till de tvättade brunnarna och lämnas i 30-60 minuter. Detta enzym har en affinitet för substansen (specifik märkning) till vilken antikropparna är bundna. Enzymet genomför en reaktion, varför denna specifika etikett (substrat) förvandlas till en färgad substans (produkt). Därefter bestäms koncentrationen av denna färgade substans med kolorimetri. Eftersom denna specifika etikett är associerad med antikroppar, betyder det att koncentrationen av den färgade reaktionsprodukten är lika med antikropparnas koncentration. Och koncentrationen av antikroppar är lika med antigenkoncentrationen. Således, som ett resultat av analysen, får vi svaret, vad är koncentrationen av den detekterade mikrob eller hormon.

Så här sker direkt enzymimmunoanalys. Imidlertid används indirekt enzymbunden immunosorbentanalys ofta idag, eftersom känsligheten och noggrannheten för indirekt är högre än direkt. Så låt oss gå vidare till en indirekt enzymbunden immunosorbentanalys.

Indirekt enzymimmunanalys - stadier av

Indirekt enzymimmunanalys har två steg. I det första steget används omärkta antikroppar mot detekterbara antigen, och i det andra steget används märkta antikroppar mot de första omärkta antikropparna. Det vill säga, det visar sig inte vara direktbindning av antikroppen till antigenet, utan en dubbel kontroll: bindningen av antikroppar till antigenet, varefter de andra antikropparna binder till antikroppen + antigenkomplexet. Som regel är antikroppar för det första steget murina och för det andra getter.

Fixering av antigener på ytan av brunnen och bindning av antigen till omärkt antikropp
Såväl som för direkt enzymimmunoanalys utförs en provtagning av biologiskt material - blod, skrapningar, utstryk. Det studerade biologiska materialet införs i brunnarna och lämnas i 15-30 minuter för att vidhäfta antigen till ytorna på brunnarna. Sedan läggs omärkta antikroppar mot antigen till brunnarna och lämnas under en tid (1-5 timmar) så att antikropparna binder till "sina" antigener och bildar ett immunkomplex (första steget). Ta sedan bort de "extra", inte bundna antikropparna, genom att hälla innehållet i hålen. Skölj med en speciell lösning för att helt ta bort alla obundna antikroppar.

Bindningen av märkta antikroppar till den komplexa antigen + omärkta antikroppen
Sedan tar de de andra antikropparna - märkta, läggs till brunnarna och lämnar igen under en tid - 15-30 minuter (andra steget). Under denna tid binds märkta antikroppar till den första - inte märkta och bildar en komplex - antikropp + antikropp + antigen. Emellertid tillsätts både märkta och omärkta antikroppar till överskottsbrunnarna. Därför är det återigen nödvändigt att ta bort de "extra", redan märkta antikropparna som inte binder till omärkta antikroppar. För att göra detta, upprepa proceduren för att hälla innehållet i hålen och tvätta med en speciell lösning.

Enzymatisk reaktion - bildning av en färgad förening
Därefter introduceras ett enzym som genomför reaktionen genom att konvertera "etiketten" till en färgad substans. Färgning utvecklas inom 5-30 minuter. Därefter genomförs kolorimetri och koncentrationen av det färgade ämnet beräknas. Eftersom koncentrationen av den färgade substansen är lika med koncentrationen av märkta antikroppar, och koncentrationen av märkt är lika med koncentrationen av omärkta antikroppar, som i sin tur är lika med antigenkoncentrationen. Således erhåller vi koncentrationen av detekterbart antigen.
En sådan dubbel kontroll i form av användning av två typer av antikroppar gjorde det möjligt att öka känsligheten och specificiteten för den enzymbundna immunosorbentanalysen. Trots förlängningen av analystiden och införandet av ytterligare steg kompenseras dessa förluster av resultatets noggrannhet. Det är därför för närvarande den stora majoriteten av enzymimmunoanalysmetoder är indirekt enzymimmunoanalys.


Vilka sjukdomar upptäcks genom enzymimmunanalys?

Vi fortsätter att överväga vilka sjukdomar och vilka biologiskt aktiva substanser som upptäcks genom enzymbunden immunosorbentanalys. Ämnen detekterade med enzymimmunanalys presenteras i tabellen.

Publikationer Om Hjärtrytmen

Hur man behandlar en diabetisk fot

Diabetiskt fotsyndrom (SDS) är det patologiska tillståndet i fötter, som uppstår mot bakgrund av diabetiska skador på kärl av olika storlekar, nervfibrer, hudintegument och ben-artikulära apparater.

Prematur ventrikulär depolarisering - symtom, orsaker, diagnos, behandling, Doctis

Prematur ventrikulär depolariseringI49.3 Prematur ventrikulär depolariseringAllmän informationVentrikulär extrasystol (ZhE) - för tidig excitation och sammandragning av ventriklarna på grund av ett heterotopiskt fokus av automatisering i hjärtat i ventriklarna.