Enzymbunden immunosorbentanalys: avkodning, metoder

Med utvecklingen av besläktade vetenskaper som genetik, molekylärbiologi, kemi, liksom tillväxten av teknisk utveckling, har modern medicin innovativa diagnostiska metoder för en mängd olika mänskliga sjukdomar. De kännetecknas av hög noggrannhet i resultat och säkerhet i prestanda. Ett av dessa sätt att identifiera hälsoproblem är enzymbunden immunosorbentanalys. Det har vunnit utbredd popularitet under det senaste decenniet och har fått ett rykte som en mycket effektiv, pålitlig och patientvänlig metod för att upptäcka sjukdomar redan innan yttre symtom börjar. Vi kommer lätt att förklara vad den här typen av diagnos är, vad är principen för dess verkan, notera fördelarna, vi kommer att orientera oss i kostnaden för en sådan analys.

Kroppens svar på patogen flora

För att förstå hur, tack vare en enzymbunden immunosorbentanalys, laboratorietekniker diagnostiserar olika sjukdomar, är det nödvändigt att förstå den fysiologiska processen som sker i kroppen under infektion med infektioner. När en patogen mikroorganism kommer in i blodomloppet uppvisar det humana immunsystemet en skyddande reaktion i form av frisättning av vissa ämnen - antikroppar. De binder till cellen och analyserar om den är en del av kroppen eller har invaderat från utsidan. Om immunsystemet bestämmer att cellen är främmande börjar antalet antikroppar öka för att bekämpa den patogena mikroorganismen.

Antikroppar finns i många former och har sina egna egenskaper. Vissa ämnen förekommer direkt under infektionsperioden, andra kvarstår hela människans liv och det är tack vare dem att de utvecklar en stabil immunitet mot en specifik sjukdom. Proteinstrukturer är indelade i följande typer: A, D, E, M, G. I medicinen kallas antikroppar immunglobuliner. Därför är det vanligt att beteckna indikatorerna för dessa ämnen i latinska bokstäver Ig.

Enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA) är baserad på data från medicinsk kunskap. Med användning av speciella antigener i laboratoriet är det möjligt att bestämma närvaron eller frånvaron av vissa antikroppar i biologiskt material. Baserat på resultaten från en sådan analys kan läkaren ställa en diagnos, samt fastställa inte bara förekomsten av en patologi, utan också begränsningen av dess ursprung, för att identifiera faranivån för patienten. En enzymbunden immunosorbentanalys oftare än andra undersöker närvaron av antikroppar från grupperna M och G.

Vad är en IFA??

Faktum är att en enzymbunden immunosorbentanalys inte är en nyhet i det moderna samhället. Det uppfanns redan på 80-talet. Men för att utföra sådana studier krävdes skrymmande dyr utrustning. Därför användes denna metod endast i speciellt utrustade vetenskapliga laboratorier: den användes för att skriva celler och vävnader. Men då fick han inte bred distribution inom diagnostisk medicin, att använda det var tekniskt svårt och extremt dyrt. Endast med utvecklingen av teknik och uppfinningen av biopolymermaterial förbättrades ELISA. Därefter började metoden att populariseras och få förtroende för medicinska kretsar.

Som nämnts ovan involverar denna metod detektering av vissa grupper av immunglobuliner i biomaterialet - blod, fostervatten, glaskropp eller cerebrospinalvätska -.

Det finns studier utan att applicera antigen på ytan och enzymbunden immunosorbentanalys, vilket involverar reaktionen i speciella brunnar. Den senare metoden har stor känslighet och tillförlitlighet, därför är det på detta sätt en analys utförs i medicinska laboratorier för att upptäcka mänskliga sjukdomar.

Enzymbunden immunosorbentanalys

Beroende på den påstådda sjukdomen används det nödvändiga antigenet från det enzymbundna immunosorbentanalyspaketet, som under den kemiska reaktionen i närvaro av infektion kommer att binda till den patogena floran. Denna process kallas ett immunsvar..

Sedan, för att visuellt bestämma resultatet av studien, genomföra den enzymatiska fasen av ELISA. Det involverar färgning av materialet med hjälp av specialreagens. I denna studie används enzymer som alkaliskt fosfatas, peroxidas och avidin. Beroende på färgen som erhållits under kemiska reaktioner bestäms resultatet av enzymimmunoanalys.

Vad är kolorimetri??

Analysen av den enzymatiska diagnosfasen utförs med metoden, som kallas "kolorimetri". Faktum är att inte bara materialets färg ger information om infektionen utan också färgtätheten till följd av kemiska reaktioner. Det är denna indikator som bestämmer koncentrationen av den patogena mikroorganismen. Om den manuella diagnostikmetoden används på gammalt sätt, byggs en speciell kalibreringsgraf för att bestämma dessa indikatorer.

I moderna laboratorier används den manuella metoden sällan i dag. För analys av ELISA används en specialapparat - en kolorimeter, där endast forskningsparametrar ställs in manuellt, och sedan utförs allt arbete, inklusive plottning, automatiskt.

ELISA-metoder

Det finns direkta och indirekta metoder för enzymimmunanalys. Den första visningen tar mindre tid, eftersom den bara har tre utförande steg. Först tillsätts specifika antikroppar till antigenen i testmaterialet placerat i speciella brunnar. Därefter avlägsnas deras överskottsmängd och den enzymatiska fasen i analysen, varigenom man erhåller resultatet.

Den indirekta metoden används mycket oftare, eftersom den har en högre känslighet jämfört med den direkta diagnosmetoden. Vid genomförandet används en dubbelstudie. Antigenet är nämligen först associerat med en omärkt antikropp och sedan med en märkt. Denna process tar mer tid, men resultatet är det mest exakta..

Reagenssatser

Enzymbundna immunosorbentanalyssatser produceras av olika tillverkare i en mängd olika konfigurationer. I Ryssland är det erkända företaget Union of Medical and Biologic. Denna tillverkare producerar reagenssatser för ELISA-studier av nästan alla infektioner som är vanliga i våra breddegrader som kan analyseras på detta sätt. Förutom reagenserna ingår ytterligare material i satserna, vilket säkerställer säkerhet, bekvämlighet och analyshastighet. Dessutom målas kemiska ämnen i olika färger, vilket minskar sannolikheten för ett fel i valet av reagenslaboratoriumassistent.

Kemisk-biologiska uppsättningar skiljer sig i relativ tillgänglighet, vilket direkt påverkar fördelningen och tillgängligheten av enzymimmunoanalys för befolkningen.

Diagnostisk metod Fördelar

Utan tvekan har enzymimmunanalys ett antal fördelar jämfört med andra diagnostiska metoder:

  1. Med det kan du till och med bestämma den obetydliga förekomsten av patogena organismer, vilket indikerar testets höga känslighet..
  2. Förmågan att upptäcka en sjukdom i de tidigaste stadierna, vilket kraftigt ökar risken för ett framgångsrikt botemedel.
  3. Enkelhet och bekvämlighet med att ta biologiskt material. En sådan analys utförs både i privata laboratorier och i statliga. Vid behov kan sjuksköterskan ta materialet från patienten hemma.
  4. En analys kräver en mycket liten mängd biomaterial.
  5. Snabbt resultat. Med modern medicinsk utrustning kan du utföra analys under dagen.
  6. Förmågan att upptäcka latenta asymptomatiska former av infektion.
  7. Studera tillgänglighet.
  8. Vid behov är massaundersökningar med denna metod möjliga..
  9. Det är möjligt att spåra utvecklingen av sjukdomen och effektiviteten hos den föreskrivna behandlingen, eftersom det är möjligt att utföra en ELISA-analys många gånger helt säker för patienten.
  10. Automatisering av analysstegen, vilket eliminerar den mänskliga faktorn och ökar tillförlitligheten hos resultaten.
  11. Reagenser för ELISA lagras under lång tid - ungefär ett år.
  12. Analysen är möjlig med fluktuationer i omgivningstemperatur..

Immunglobuliner i grupp M

Antikroppar från grupp M produceras av immunsystemet omedelbart efter detekteringen av ett främmande antigen. Om enzymimmunoanalysen avslutades med detekteringen av sådana ämnen i biomaterialet, indikerar det därför ett akut steg i sjukdomsförloppet, den primära infektionen. Immunglobuliner från grupp M kan finnas i kroppen i upp till en månad, beroende på infektionssort. Sedan minskar antalet för att fullständigt försvinna.

Immunoglobuliner i grupp G

Proteinstrukturer av typ G verkar ersätta immunoglobuliner i grupp M. Dessa ämnen ger stabil, i de flesta fall, livslång immunitet mot sjukdomen. Bestämning av proteinstrukturen för IgG i testmaterialet indikerar att kroppen tidigare har träffat en patogen och har en skyddande reaktion från återinfektion.

Indikationer för diagnos

En enzymbunden immunosorbentanalys används för att bestämma olika infektionssjukdomar, hormonella tillstånd och allergitest utförs. Nämligen:

  • bestämma nivån på sköldkörtelhormoner;
  • indikatorer för den reproduktiva hormonella panelen;
  • tumörmarkörer;
  • upptäcka patogener av infektionssjukdomar såsom cytomegalovirus, hepatit, toxoplasma, rubella, mässling, tuberkulos, klamydia, syfilis, mycoplasma, ureplasma, candida, giardia och till och med HIV;
  • de diagnostiserar autoimmuna sjukdomar. I synnerhet används enzymimmunanalys för att studera sköldkörtelhormoner: TSH, TG, T3 och T4.

Förutom diagnostiska ändamål används metoden enzymimmunoanalys i medicinsk forskning.

Hur tas materialet?

I de flesta fall rekommenderas provtagning av venöst blod för analys. Efter bearbetning och beredning av materialet för studien utförs en enzymbunden immunosorbentanalys för serum eller plasma.

Studien av den hormonella panelen kräver särskild uppmärksamhet, eftersom det i detta fall är oerhört viktigt att ta hänsyn till funktionerna i materialintaget. Till exempel kräver diagnosen av de flesta hormoner i en kvinnas reproduktionssystem att ta venöst blod på vissa dagar av menstruationscykeln. Ett antal andra hormoner påverkas av yttre faktorer: säsongsbetonade, tid på dagen, patientens psykologiska tillstånd och mycket mer. Om du inte tar hänsyn till specifika faktorer kan du få ett falskt resultat, vilket kommer att leda till en förvärring av sjukdomen eller felaktig ordinerad behandling.

I vissa, ofta mer komplicerade fall, kan analys kräva cerebrospinalvätska, glasartad humor eller fostervatten hos en gravid kvinna. Förfaranden för insamling av dessa biologiska material innebär en viss risk, har kontraindikationer och en återhämtningsperiod. Därför bör en sådan enzymbunden immunosorbentanalys endast utföras enligt läkarnas vittnesmål och under hans professionella övervakning. Avkryptering i detta fall kräver speciell medicinsk kunskap och kan ta lite tid.

Analysförberedelse

En enzymkopplad immunosorbentanalys bör genomföras, i enlighet med alla rekommendationer, eftersom yttre faktorer påverkar studiens resultat. Till exempel är det viktigt att donera venöst blod på tom mage på morgonen (upp till 11 timmar). 2 veckor innan det påstådda intaget av materialet måste du sluta ta mediciner, särskilt hormoner. Några dagar före studien bör du avstå från att dricka alkohol och feta livsmedel, samt utesluta fysisk aktivitet, oro och stress..

Avkryptering av resultaten

Att dechiffrera resultaten av en enzymbunden immunosorbentanalys kräver särskild kunskap om egenskaperna hos proteinstrukturerna (antikroppar), som beskrivits ovan (IgG och IgM). I enlighet med dessa data analyseras forskningsindikatorer. Tabellen beskriver alternativen som kan erhållas under analysen:

Enzymimmunanalys: ett transkript
Immunoglobuliner MImmunoglobuliner GPåstådd dekryptering
negativtnegativtKroppen har aldrig upplevt denna infektion. Det finns varken en patogen eller antikroppar mot den.
negativtpositivtKroppen har utvecklat en stark immunitet mot infektion..
positivtnegativtAkut infektionsform.
positivtpositivtTroligtvis primär infektion, men ytterligare diagnostiska test krävs.

Genom att analysera den presenterade tabellen kan vi dra slutsatsen att i de flesta fall krävs ytterligare studier för att bekräfta diagnosen. Enzymbunden immunosorbentanalys ensam kan inte ge ett definitivt svar. Normen i detta fall har inga tydliga gränser: de detekterade proteinerna i grupp G indikerar endast att kroppen tidigare har infekterats med en bestämd patogen. Men samma resultat kan indikera förekomsten av en akut fas - det är viktigt att jämföra många faktorer och indikatorer för att ställa rätt diagnos.

Riskfaktorer

ELISA är 90% korrekt. Ändå finns det riskfaktorer som påverkar snedvridningen av det diagnostiska resultatet: funktionsfel i utrustningen, felaktig materialuppsamling, lagring och transport, utan hänsyn till andra externa faktorer.

Diagnostik efter blodtransfusion, hemolys, kirurgi, biopsi eller punktering av biologiskt material rekommenderas inte - detta kan också påverka resultaten av indikatorer.

Analyskostnad

Kostnaden för en diagnostisk studie har ett brett spektrum och beror på typen av analys och antigenet som ska bestämmas, eftersom baserat på dessa faktorer beräknas kostnaden för reagenssatser och analysens komplexitet. Men i de flesta fall är enzymbunden immunosorbentanalys tillgänglig för många patienter. Priset är från 300 r. upp till 2000 r.

ELISA är en prisvärd, snabb och mycket effektiv metod för att diagnostisera en stor lista över sjukdomar. Men endast en kvalificerad läkare är berättigad att dechiffrera resultaten och ställa en diagnos.

Enzymimmunanalys med en uppdelning av indikatorer

Immun- och enzymatiska reaktioner

Som namnet antyder inkluderar ett IFA-blodprov flera komponenter, nämligen en immun- och enzymatisk reaktion.
En immunreaktion låter dig ansluta cellelement och patogener, medan en enzymatisk ger dig möjlighet att visualisera och utvärdera resultatet av en tidigare reaktion.

Överväg varje reaktion mer detaljerat..

Vad är immunsvar??

Immun är specifika reaktioner som gör att du kan binda ett antigen till en antikropp och skapa ett immunkomplex. Vad betyder det här? Först och främst är det nödvändigt att förstå att vilken cellyta som helst innehåller molekyler som innehåller data om cellen, kallad antigen och uppdelad i:

Enskilda antigener har, trots vissa likheter, många skillnader. De finns i en viss organisme och upprepas aldrig i andra. Artenantigener finns i organismerna av olika typer av levande saker. Så, till exempel, apor, hästar eller hundar har sina egna, till skillnad från något antigen. Det är därför antigen av denna typ används av immunsystemet för att känna igen sina egna och främmande celler, vilket faktiskt är grunden för enzymet immunanalys.

Hur känns igen antigen? Allt är klart nog här. Enkelt uttryckt fångar en immuncell en cell som har orsakat den att "misstänka" och jämför dess antigen med beskrivningen i åtanke. Om antigenen i den tvivelaktiga cellen motsvarar den, "frigör" immuncellen den och fortsätter. Om beskrivningen är annorlunda, är organismens svar på hotet en - förstörelse. Dessutom är erkännandet av "fienden" i detta fall nästan 100%.

Immunoanalys av sandwich-typ

Fikon. 2. Schematisk framställning av immunoassay-typen "sandwich". ATP är en antikropp på ett substrat, ATd är en detekteringsantikropp, AH är en antigen, M är en etikett kovalent kopplad till en detekteringsantikropp, P är ett substrat på vilket antikroppen på substratet adsorberas.

I denna variant av immunoanalys (fig. 2) används ett par antikroppar specifika för rumsligt avlägsna epitoper av det studerade antigenet.

I. Adsorption av substratantikroppar

I brunnarna på en 96-brunns immunoassay-platta sorberas substratantikroppar med 1-2 μg per brunn i 100 μl fosfatbuffrad saltlösning (PBS). Inkubation utförs i 30 minuter vid rumstemperatur och skakas på en horisontell tablettskakare. Tvättning (tvåfaldig) av obundna antigenmolekyler utförs med fosfatbuffrad saltlösning innehållande 0,1% Tween-20 (PBST).

II. Låsa

För att blockera icke-specifika bindningsställen fylls plattbrunnar med PBST och inkuberas under 10-15 minuter vid rumstemperatur.

III. Antigeninkubation

50 ul av testlösningen eller standardutspädningar av antigen sättes till brunnarna i den förförsorberade antikroppsplattan. Antigenutspädningar bör beredas på basis av PBST, eftersom Tween-20 reducerar den ospecifika bindningen av proteinmolekyler till varandra och till tabletten. Både testlösningen och standardutspädningar av antigenet införs i par (eller 3 replikat) med användning av två (tre) brunnar för varje proteinutspädning. Inkubation utförs vid rumstemperatur under 30 minuter under konstant omröring. Tvättning utförs med PBST-lösning 3 gånger.

IV. Inkubation av enzymmärkta antikroppar

100 ul av en lösning av specifika antikroppar konjugerade med en enzymmarkör tillsätts till plattans brunnar. Den optimala koncentrationen av konjugerade antikroppar indikeras vanligtvis av tillverkaren (använd vanligtvis en koncentration av 2-4 μg / ml). Inkubation med antikroppar innehållande enzymetiketten utförs under 30 minuter vid rumstemperatur och skakas på en horisontell plattskakare. Tvättning utförs med PBST 5-6 gånger.

V. Genomföra en enzymatisk reaktion åtföljd av utseendet på en färgad produkt

100 ul substratlösning sättes till brunnarna och inkuberas under 10 minuter vid rumstemperatur under konstant omrörning..

VI. Stoppa den enzymatiska reaktionen

Innan mätning av den optiska densiteten stoppas en färgreaktion med användning av 0,5 M H24. Efter inkubation tillsättes 50 ul av en lösning av 0,5 M svavelsyra till brunnarna med en arbetslösning av RPD. Efter det kan du omedelbart börja mäta den optiska densiteten.

VII. Absorbansmätning

Den optiska densiteten för lösningen av den färgade produkten mäts vid X = 490 nm med användning av en tablettspektrofotometer.

tryckversion

Mer om immunoglobuliner

Totalt producerar den mänskliga kroppen 5 kända klasser av antikroppar, som betecknas Ig (som står för immunoglobuliner), som tillhör klasserna A, M, G, E och D. Alla av dem är av stor vikt vid tolkningen av resultaten från ELISA. Naturligtvis finns det mycket mer komplex, och inte alla är fortfarande öppna. Men vid diagnosen olika sjukdomar är de första tre typerna av antikroppar mest värdefulla. Ett ELISA-blodprov använder maximalt information: ögonblicket för antikroppar i blodet, förändringen i deras koncentration beroende på tid, försvinnningsperioden, och typen av specifik antikropp.

Deltagare i den primära, akuta infektionsprocessen är alltså immunglobuliner av klass M, som alltid indikerar en akut fas, även när sjukdomen raderas kliniskt. Ett typiskt exempel är den anterteriska formen av akut viral hepatit B eller C. En enzymbunden immunosorbentanalys för hepatit kommer att visa att en person har akut hepatit, och symtom som hypokondri, munnorrhet, värkande leder och andra icke-specifika symtom är lätt att förstå.

Efter flera veckor hittas dessa antikroppar i en alltmer försvinnande koncentration, vilket ger immunglobuliner av klass G. De upptäcks i blodet i månader, till och med år, och indikerar endera återhämtning och kan sedan stanna kvar i livet och bilda en stark immunitet. Detta indikerar ett kraftfullt försvar mot patogenantigener. Så det är antikropparna i denna klass som gör en person immun mot upprepade fall av miltbrand och pest. Men det finns tillfällen då dessa antikroppar inte stör antigenens skadliga effekter. I det här fallet kan vi prata om att öka aktiviteten i den kroniska processen.

Vad gäller IgE har den tillämpningar för diagnos av olika parasitiska infektioner och allergiska tillstånd, och IgD har en extrafunktion: den enzymbundna immunosorbentanalysen gör att du kan använda den vid den omfattande diagnosen bronkialastma och autoimmuna tillstånd. Naturligtvis är det mycket mer komplicerat att dechiffrera ELISA-analysen, och immunologer kan berätta mycket mer. Vilka är indikationerna på att patienten självständigt kan gå till laboratoriet för att utföra studier?

Hur analyserar ELISA

Under villkoren för utrustade laboratorier och medicinska centra kan treponemal bestämning med enzymimmunoanalysen utföras med flera metoder, som kallas direkt och indirekt. Men basen för dessa reaktioner är ett sätt som gör att du kan analysera för syfilis av ELISA. Detta test utförs på ett visst sätt..

Laboratoriets läkare har en speciell tablett - en panel med hål i form av runda hålrum i mängden upp till hundra. De speciellt framställda koncentrerade syfilisantigenerna används också i satser för denna analys, som placeras i ELISA-plattans brunnar. Efter att ha tagit patientens blod på morgonen på tom mage separeras serum från blodet och placeras i brunnar med antigener. Antigen-antikroppsbindningsreaktion uppträder i brunnar.

ELISA för syfilis är baserad på reaktionen på bindning av immunföreningarna i det första steget och konjugat med en speciell enzymmarkör, som krävs för att läsa reaktionens kvalitet. I detta skede införs förutom enzymatiskt peroxidas, kromogena färgämnen för att färga materialet beroende på resultatet av reaktionen.

Baserat på de framträdda färgade hålen i surfplattan dekrypteras testet. I uppsättningar av olika ELISA-metoder bifogas tabeller över färgscheman, som bestämmer mängden, nivån av immunglobuliner, antikroppar från patientens serum i en enhetsvolym.

För att utvärdera resultatet av reaktionen används också specialutrustning - en spektrofotometer för fotometri och uppskattning av materialets densitet i brunnarna jämfört med kontrollprover. Baserat på densiteten erhålls ett resultat som är klart fastställt för varje orsakande syfilismedel inom gränserna för normer och patologi.

allmän information

En enzymbunden immunosorbentanalys kan användas för att bestämma nivån av hormoner, immunoglobuliner, immunologiska komplex såväl som ett antal biologiskt aktiva substanser. Som ett material för en sådan studie kan du donera blod, cerebrospinalvätska, innehållet i glaskroppen etc..

En enzymbunden immunosorbentanalys har nyligen använts alltmer på grund av ett antal fördelar:

  • känslighet över 90 procent;
  • stabil lagring av ingredienser som behövs för hållning;
  • snabb och enkel diagnostik;
  • minimikostnader för material;
  • automatiserad process;
  • låg kostnad.

Dessutom låter ELISA identifiera infektioner, inklusive hepatit, i ett tidigt skede. Det är därför det ibland rekommenderas istället för PCR-studier, samt under graviditet. Men det gör inte utan nackdelar. Resultaten av sådana tester kommer bara att prata om kroppens svar på patogenen, men det kommer inte att fastställas. I de flesta fall rekommenderas en kombination av ELISA och PCR..

Med hjälp av IFA-testning kan du ta reda på resultaten från en hel uppsättning. I synnerhet bestäms normen för sköldkörtelhormoner, närvaron av tumörmarkörer och ett antal infektioner. Normen väljs separat för varje indikator. Så för vuxna bör ELISA normalt visa TG-värden inom 70 IE / ml, T4 i området 64 till 146 nmol / L, T3 beräknas i mängden 1,8-2,8 nmol / L.

Vid planering av en graviditet kan sådana tester göras för att bestämma könshormoner. I synnerhet luteinisering. Dess värden kommer att variera beroende på cykeldagen. I synnerhet är det maximala värdet som kan observeras 150 och det minsta 1 mU / L.

När ELISA används för att bestämma könshormonet hos män, är en siffra i intervallet 0,5 till 10 mU / L en normal indikator. Om kronisk gonadotropin undersöks kommer resultaten att variera beroende på kön. Speciellt för vuxna män och kvinnor i frånvaro av graviditet bör indikatorn vara inom 5 mU / ml. Om testning utförs under graviditeten kan resultaten vara olika beroende på trimestern upp till tiotusentals enheter.

Vad är klamydia

PCR, liksom ELISA, används ofta i moderna laboratorier för diagnos av sexuellt överförda sjukdomar. Samtidigt föreslår läkare ofta att utföra båda testerna. Många patienter tror att detta är en extra pengar, men dessa test har en allvarlig skillnad, även om de vid första anblicken kan verka identiska. En klassificering av psykologiska forskningsmetoder kan dock till viss del tillämpas.

Resultaten av PCR och ELISA används ofta under graviditet, när det är nödvändigt att utesluta klamydial infektion. Ofta är ett så positivt resultat för infektionen ett svar på frågan om män och kvinnor, "Varför kan jag inte bli gravid". Förutom risken för infertilitet utgör klamydia under graviditeten en risk för infektion hos barnet.

Det huvudsakliga problemet för diagnos av en sådan infektion är den asymptomatiska kursen. Emellertid kan specifika antikroppar detekteras tio dagar efter infektion. Om ett PCR-test under graviditeten visar på förekomsten eller frånvaron av sådana patogener, kommer ELISA att berätta vilket steg processen är nu

En sådan studie är också viktig för att utvärdera resultaten av terapi.

Avkodningsanalys

En analys av hepatit eller någon annan patogen i ELISA-prestanda väcker ofta frågor. Särskilt hur dekrypteringen genomförs. För tillfället indikerar resultaten ett av fem immunoglobuliner: IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. Det är de som sticker ut, eftersom de andras roll inte har klargjorts till slut. De viktigaste för studien är klasserna A, M och G.

Immunoglobulin A är huvudsakligen ansvarig för skyddande funktioner i slemhinnorna. Resultatet av deras närvaro kommer att vara negativt om sjukdomen identifieras i sin akuta form i början. Utseendet på sådana skyddsmarkörer förekommer vanligtvis två veckor efter sjukdomens början. Ibland erhålls ett positivt resultat även senare.

Huvudfunktionen för dessa antikroppar är detektion och förstörelse av mikroorganismer. Deras antal minskas alltid om sjukdomen avtar. Vanligtvis, efter åtta veckor från sjukdomens början, kommer ett positivt resultat att vara frånvarande. Detektion av immunglobuliner i klass A vid ett senare datum kan indikera en process som flyter in i en kronisk.

De viktigaste markörerna, vars avkodning hjälper till att bestämma den akuta fasen i patologin, är immunglobuliner av klass M. De kan upptäckas i blodet fem dagar efter infektion. De försenas i blodet i cirka sex veckor, varefter deras försvinnande inträffar snabbt.

Immunoglobuliner av klass G är ansvariga för bildandet av en kvarvarande immuneffekt. Cirka en månad efter infektion börjar de upptäckas i blodet. I framtiden sträcker sig deras definition under många månader. Ofta kan du observera dem hela ditt liv. Sådana immunoglobuliner bildas som en skyddande reaktion, vilket eliminerar re-infektion. Exempelvis bildas sådana immunglobuliner i blodet hos en person som hade vattkoppor under barndomen och följaktligen fick immunitet till slutet av livet. Naturligtvis finns det andra infektioner vars återkomst är möjlig. I detta fall kommer analysen att detektera återväxt av denna grupp immunglobuliner.

Immunoglobuliner E används för att upptäcka parasiter i kroppen. Immunoglobulinet som tillhör grupp D är beläget i B-lymfocyter och finns i vissa mängder hos friska människor. Vid ungefär tio års ålder når de sina maximala värden. Mängden sådant immunglobulin ökar under graviditeten. Dessutom kan närvaron av det i en större mängd än vanligt vara ett tecken på bronkialastma, ett immunbristillstånd.

dekryptering

Antikroppar, de är också immunoglobuliner, är indelade i fem klasser, men vanligtvis bestäms endast tre av dem: M, G och A, som ackumuleras i kroppen under olika perioder efter infektion.

Immunoglobuliner M visas först, de är IgM. De uppstår från 4-5 dagar efter infektion och är i blodet i en och en halv månad, varefter de försvinner. Om ELISA visar sin närvaro har vi att göra med en akut period av sjukdomen eller dess förvärring.

På tre till fyra veckor inträffar IgG, det vill säga immunglobuliner av klass G. De kan vara närvarande i flera månader eller till och med år i rad. Om ELISA utfördes två gånger med ett intervall på två veckor, och mängden IgG i båda proverna ökades, kan vi prata om infektion eller re-infektion med den.

IgA, det vill säga antikroppar av klass A upptäcks efter en förvärring av infektionen eller en månad efter dess uppträdande i kroppen. De flesta av dem cirkulerar i våra slemhinnor och endast en femtedel i blodet. De försvinner först efter att alla smittämnen förstörts, det vill säga minst två veckor efter infektionen, högst åtta.

Om analysen av ELISA efter botemedel visar sin närvaro har sjukdomen gått in i det kroniska stadiet.

När dekryptering utförs måste du också vara uppmärksam på skylten + och - i formen. Endast en läkare kan fatta en fullständig dom, men vissa funktioner i kroppen kan bedömas på grundval av följande uppgifter:

Endast en läkare kan fatta en fullständig dom, men vissa funktioner i kroppen kan bedömas på grundval av följande uppgifter:

  • Brist på immunitet mot infektioner indikeras av en sådan kombination av indikatorer som JgM, JgG, JgA med ett minus överallt;
  • Närvaron av immunitet efter ett vaccin eller en infektion indikeras av JgM och JgA med ett minustecken och JgG med ett plustecken (JgG (+));
  • Följande indikatorer kan berätta om förekomsten av akut infektion: JgA (- / +), JgG (- / +) och JgM (+);
  • Vid förvärring av kroniska infektioner kommer formuläret att innehålla följande notering: JgM, JgG och JgA med pluss överallt;
  • Vid kroniska infektioner observeras följande bild: JgG (+/-), JgM (-) och JgA (+/-);
  • JgM (-) indikerar återhämtning.

En studie såsom en enzymbunden immunosorbentanalys av blodserum utförs också ofta. Det behövs för studier av sköldkörtelhormoner. Indikatorerna för sådana hormoner som tyroxin, fritt tyroxin, triiodotyronin, fritt triiodotyronin och tyroglobulin är viktiga här.

Dessutom är en sådan studie användbar för diagnos av infektionssjukdomar och autoimmuna sjukdomar..

Muscovites testas för coronavirus på ett nytt sätt. Vilka är funktionerna i ELISA-analys

Anatoly Minkin, Olga Nizhelskaya

Massvisning

Sergei Sobyanin sade att frågan om begränsningar som infördes på grund av coronavirus borde tas upp. Du kan inte ta bort dem för tidigt så att den andra infektionsvågen inte börjar, men det är också omöjligt att tvinga invånarna att stanna i självisolering under lång tid.

För ett slutligt beslut måste du förstå hur många som har varit sjuka och utvecklat immunitet. För många försvinner infektionen utan några symtom, men de smittar andra..

Staden har redan genomfört mer än 1,3 miljoner PCR-test och 100 tusen lungtester på datortomografi. Men det här räcker inte. Från fredag ​​15 maj kommer testning av muskoviter att börja använda enzymbundna immunosorbentanalyser. Varje dag väljer slumpmässigt cirka 70 tusen medborgare som kan donera blod.

De kommer att accepteras i 30 kliniker. En inbjudan att skicka en analys skickas via SMS eller e-post. Inbjudan har en länk där du kan boka tid med läkaren. Automatiserade analysatorer testar på närvaron av antikroppar mot coronavirus i blodet. I slutet av maj kommer antalet tester att överstiga 200 tusen per dag..

Den insamlade informationen hjälper till att förstå vilken andel muskoviter som redan har varit sjuk och fått immunitet, hur många som är smittade, och det kommer också att bli tydligt vad dynamiken i smittespridningen är. Alla testdeltagare känner igen sin immunstatus. Potentiella bärare av infektionen kommer att skickas till sjukhuset och till självisolering. Alla uppgifter från undersökningen kommer att ligga till grund för ett beslut om de införda begränsningarna.

Vad testet kommer att visa

Enzymbunden immunosorbentanalys är en diagnostisk metod som är baserad på reaktion av antikroppar. När ett virus kommer in i kroppen börjar det producera speciella proteiner - antigener. Immunsystemet reagerar på främlingar och frisätter antikroppsproteiner (immunoglobuliner). Det är deras närvaro i blodet som gör det möjligt att ta reda på om en person har haft kontakt med viruset.

Om denna "360" sade doktorn för medicinska vetenskaper, biträdande chef för Moskva forskningsinstitutet för epidemiologi och mikrobiologi uppkallad efter G. N. Gabrichevsky Rospotrebnadzor Evgeni Selkov.

”Du kan bestämma om en person var sjuk eller nu är i den akuta fasen för de proteiner som upptäcks: immunoglobulin G-klass eller immunoglobulin M-klass. M - detta är en akut fas, G - det betyder att en person har varit sjuk nyligen och hans immunitet har börjat bildas, ”förklarade hon.

Experten noterade att analysen var korrekt. Det är nödvändigt, särskilt i de fall då patogenen som har trängt in i kroppen inte leder till en sjukdom. Immunitet kämpar med honom inuti, men personen själv märker inte det. Detta är särskilt viktigt nu, i en situation med coronavirus, när det finns många asymptomatiska bärare..

”IFA kommer att visa om den här personen var sjuk eller inte. Har han immunitet eller inte. Kanske var han sjuk, lätt lidit, märkte det inte. Den andra viktiga punkten: nu kan du bestämma immunitetstillståndet hos en stor grupp människor. Om de har antikroppar kan du vara lugn, "sammanfattade Evgenia Selkova.

Så fungerar IFA

När ett virus kommer in i kroppen producerar immunsystemet först immunglobuliner av klass M - det finns särskilt många av dem, och de är de första som rusar för att förstöra antigenen som viruset producerar. Immunoglobuliner av klass G visas i slutet för att avsluta resterna av virusantigenen, och sedan kvarstår de i blodet för att förhindra viruset från att komma in i kroppen en andra gång..

Vaccinet fungerar också när försvagade antigener av viruset administreras till en person för att utveckla immunitet..

För att avgöra om en person har immunitet tar specialister blod för analys. Det läggs till en speciell lösning, där patogenantigenerna redan finns, och de tittar på reaktionen. Om det inte finns alls, har personen ännu inte smittats. Om reaktionen är våldsam, var patogenen i kroppen eller kvarstår. Det beror på typen av immunglobulin M eller G.

Ifa metod hur är

Syftet med lektionen. Att lära eleverna principen om metoden för fluorescerande antikroppar och tekniken för att sätta upp immunofluorescensreaktionen, med principen och tekniken för att utföra en enzymbunden immunosorbentanalys.

Utrustning och material. Inaktiverade kulturer av brucella och salmonella, 96% etanol, PBS (pH 7,2. 7,4), våtkammare (petriskålar, torkmedel), självlysande serum mot brucella, salmonella, kaninimmunoglobuliner, positivt brucelloserum, klar ELISA demonstrationsläkemedel, självlysande mikroskop.

I dessa serologiska reaktioner används antikroppar (immunsera) märkta med fluorokrom eller enzymer, och därefter registreras bildningen av antigen-antikroppskomplexet med speciella metoder. I vissa utföringsformer införs ELISA-enzymmärkning i antigenet.

Metoden för fluorescerande antikroppar (MFA). Denna komplexa metod kombinerar en serologisk reaktion där en specifik interaktion mellan ett antigen och en antikropp äger rum med bildandet av ett immunkomplex och en mikroskopisk undersökning med vilken detta komplex detekteras.

Vid immunofluorescensreaktionen används antikroppar till vilka fluorokrom är bundet (oftare är fluorescein isotiocinat). Sådana antikroppar behåller förmågan att specifikt reagera med antigenet och, tack vare fluorokromet, glöder under påverkan av ultravioletta strålar. Vid angivande av MFA fixeras det mikrobiella antigenet på en glideskiva och behandlas med självlysande antikroppar. Därefter tvättas läkemedlet med vatten från obundna antikroppar och betraktas i ett självlysande mikroskop. Om antikroppar specifikt motsvarar detta antigen, bildar de ett starkt komplex med antigenet och, under självlysande mikroskopi, finns lysande mikrobiella celler i beredningen (fig. 70).

Fördelen med MFA som ett diagnostiskt förfarande är att det med dess hjälp är möjligt att serologiskt identifiera mikroorganismen direkt i det patologiska materialet på två till tre timmar, utan isolering i en ren kultur (expressmetod). Liksom andra serologiska reaktioner används MFA också för att detektera antikroppar i djurblod..

Beredning av läkemedlet för MFA. Om ett smittämne (antigen) upptäcks på en glasrutschbana, framställs fingeravtryck från organ eller annat material. För att upptäcka antikroppar i testblodserumet framställs utstryk på en glasrutschbana från ett känt antigen, till exempel det orsakande medlet för salmonellos, miltbrand, etc. Beredningen med det applicerade materialet (bakteriesuspension, smutsavtryck) torkas i luft och fixeras med aceton (5 min), eller etanol (10. 15 min) eller metanol (5. 10 min). Läkemedlet kan också fixeras genom uppvärmning, som med vanlig ljusmikroskopi. Smettryck från organ och vävnader behandlas bäst med kylning av aceton till -20 ° C. 4 min. Beroende på specifika uppgifter utförs färgning av färdiga preparat med självlysande serum på olika sätt.

Direkt MFA. Utvecklad av Coons et al. (1950). En droppe luminescerande immunserum i en arbetsutspädning innehållande antikroppar mot det önskade antigenet appliceras på en glideskiva med ett fixerat antigen. För att undvika torkning placeras beredningen i en fuktig kammare (petriskål) med filterpapper fuktat med vatten och förvaras i en termostat vid 37. 38 ° C. 30 minuter. Sedan läkemedlet 5. 10 minuter tvättades från obundna immunglobuliner med rinnande (kran) vatten med ett pH av minst 7,0. Det tvättade preparatet torkas med filterpapper och mikroskopiskt..

Direkta MFA: er används endast för att identifiera ett okänt antigen; dess nackdel är behovet av att framställa självlysande serum för varje typ av identifierbar mikroorganism.

Indirekt MFA.Applicerad i två versioner.

Tvåstegs MFA: s föreslogs av Weller och Coons (1954). Detta alternativ anses vara mer universellt, eftersom med hjälp av ett självlysande antispecieserum kan olika typer av mikroorganismer detekteras..

En droppe omärkt immunserum (serum från det första steget) appliceras på antigenet. Beredningen förvaras i en termostat 15. 30 minuter, tvättas sedan för att avlägsna obundna antikroppar från immunserumet och torkas (se det direkta alternativet). Om serumantikropparna i det första steget motsvarar antigenet, tvättar inte vatten ut det bildade AG-AT-komplexet (antikroppar fixeras på antigenet).

En droppe luminescerande antispecieserum (serum från det andra steget) i en fungerande titer appliceras på det torkade preparatet. Läkemedlet placeras på nytt i en termostat i en våt kammare under 15,30 minuter, tvättas sedan med vatten och torkas. Anti-art-serum är en fluorokrom-märkt antikropp mot immunoglobuliner från djurblod av den art från vilken det första stegets immunserum erhölls. Således tjänar antikroppar från det första serumet som ett antigen för märkta antikroppar från antispecieserum. Som ett resultat fästes antikroppar från det andra steget till AG-AT-komplexet bildat i det första steget, och ett dubbelkomplex bildas, vilket kan detekteras i ett självlysande mikroskop.

Mångsidigheten hos det indirekta alternativet beror på det faktum att i det första steget, med användning av immunserum erhållna från djur av samma art (till exempel från hästar) mot olika mikroorganismer, i det andra steget, med hjälp av ett enstaka anti-art-serum, kan ett obegränsat antal patogener av infektionssjukdomar identifieras.

Trestegs MFA är en variant av DSC på glas. I detta fall detekteras tillhörande komplement i immunkomplexet på glas med hjälp av självlysande serum (fig. 71).

Med användning av en tvåstegs- eller trestegs MFA, med användning av ett känt antigen, kan antikroppar detekteras i blodet från djur.

Kontroller behövs för att bekräfta MFA-resultatens specificitet. För den direkta varianten är en kontroll tillräcklig: homologa och heterologa antigeniskt mikroorganismer behandlas med självlysande serum. I det första fallet glödar bakterier, i det andra finns det ingen glöd.

För det indirekta alternativet ställs två kontroller in: 1) utstryk som innehåller homologa och antigeniskt heterologa mikroorganismer behandlas med antispecies självlysande serum. I frånvaro av antikroppar i det första steget bör celler inte lysa upp; 2) utstryk med homologa och heterologa antigeniskt bakterier behandlas med immun (antimikrobiellt) serum (första steget) följt av applicering av fluorescerande antiglobulin (antispecies) serum (andra steg). En specifik glöd av bakterier observeras i det första fallet, i det andra är den frånvarande.

Bedömning av MFA-resultat. Ta hänsyn till glödets ljusstyrka, färg, lokalisering och struktur. Hos bakterier färgade (behandlade) med självlysande serum märkta med fluoresceinisocyanat observeras vanligtvis en ljusgrön glöd vid cellens periferi i form av en fälg eller gloria, den centrala delen av bakterierna lyser svagt. Denna glödets karaktär förklaras av det faktum att flera gånger fler antikroppar projiceras från ett enhetsområde på periferin av den mikrobiella cellen på retina i observatörens öga än från dess centrala del. Man bör komma ihåg att i plastbakterier (leptospira, vibrios) lyser hela cellen. I celler nedsänkta i vävnadsvätska, och i unga antraxbaciller, är konturen vanligtvis inte uttalad.

Glödens intensitet uppskattas av fyrkorssystemet: 1) (++++) - mycket ljus fluorescens vid periferin av den mikrobiella cellen, vilket klart står i kontrast till den mörka centrala delen av cellen; 2) (+++) - ljus fluorescens i cellens periferi; 3) (++) - en svag glöd av cellens periferi; 4) (+) - det finns ingen kontrastglöd i periferin och den centrala delen av den mikrobiella cellen. Avsaknaden av en specifik glöd indikeras av ett minustecken (mikroorganismernas skuggor är synliga). Vid diagnos av olika patogener av sjukdomar anses en specifik glöd av bakterieceller vara ett positivt resultat inte mindre än fyra eller tre kors.

Enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA). Denna metod fick distribution efter att uppgiften att införa en enzymmarkör i molekylerna av antikroppar eller antigener löstes. Antikroppar associerade med enzymet bibehåller förmågan att specifikt reagera med ett homologt antigen, och enzymet interagerar med motsvarande substrat.

ELISA används vanligtvis i histokemiska (immunoperoxidasreaktion) och fastfasvarianter.

Histokemisk ELISA. Med hjälp av denna metod finns mikrobiella antigener vanligtvis i fingeravtrycksutstryk, blodutstryk och histoskivor. Liksom i fallet med MPA används peroxidasreaktion i direkta och indirekta versioner.

Direkt immunoperoxidasreaktion. Som en känd komponent används peroxidas-märkta antikroppar mot vilken patogen mikroorganism som helst. Beredningen, till exempel fingeravtrycksspritt, fixeras med kyld aceton (-15-20 ° C), torkas, fyra till fem droppar av konjugatet appliceras i arbetstitern (märkta antikroppar), inkuberas i en fuktig kammare vid 37 ° C. 2 timmar, tvättas med fysiologisk med en lösning på 15 minuter, sköljd med destillerat vatten, torkad, appliceras flera droppar av en substratlösning på beredningen (25 mg 3,3-DAB • 4HC1 löstes i 100 ml 0,05 M Tris-buffert med ett pH av 7,5 och 25 ml av denna lösning kombineras med 3 ml 0,5% väteperoxidlösning). Beredningen med substratet hålls i 5,10 minuter, tvättas i fysiologisk saltlösning i 10 minuter, sköljdes med destillerat vatten och mikroskopiskt.

Om det önskade mikrobiella antigenet finns i testmaterialet binder peroxidas-märkta antikroppar specifikt till det. Införandet av ett substrat till peroxidas leder till bildandet av en färgad produkt, synlig under mikroskopi, först som granulat av blått och senare gulbrunt.

Indirekt immunoperoxidasreaktion. Liksom i MFA: er används peroxidas-märkta antikroppar för immunoglobudiner av en viss djurart. Vid det första steget behandlas beredningen med testmaterialet fixerat med kyld aceton i en fuktig kammare vid 37. 38 С ^ 2 delar immunserum (0,2 0,3 ml) innehållande omärkta antikroppar mot det önskade antigenet. Därefter tvättas beredningen med fysiologisk saltlösning under 5 minuter, torkas och behandlas vid 37. 38 ° C 1. 6 timmar i en fuktad kammare med antikroppar märkta med peroxidas (konjugat i arbetsutspädning). Efterföljande operationer och registrering av resultat liknar den direkta varianten av peroxidasreaktion.

Fast fas ELISA. Applicera mest. I detta fall fixeras antikroppar eller antigener på olösliga bärare: mikropaneler, glas eller nylonbollar.

För olika reaktionsvarianter beaktas resultaten instrumentellt eller visuellt.

Sandwichantigendetektering består av följande steg.

Brunnar av polystyrenmikropaneler sensibiliseras med antikroppar specifika för det önskade antigenet [2] i en koncentration av 10. 30 μg / ml. Typiskt sättes 0,2 ml antikroppslösning till brunnen i en buffert med ett pH av 9,6, hålls vid 37 ° C under 1 timme och lämnas sedan över natten vid 4 ° C. Lösningen av panelen immunoglobuliner avlägsnas och tvättas med PBS (pH 7,4) tre gånger för att ta bort överskott av fria (icke-adsorberade) antikroppar.

0,2 ml av en lösning innehållande testantigenet sättes till brunnarna och inkuberas vid 37 ° C under 2 timmar, sedan tvättas panelerna igen, såsom tidigare beskrivits.

0,2 ml enzymmärkta specifika antikroppar (konjugat) tillsätts till brunnarna; panelerna inkuberas vid 37 ° C 1. 2 timmar, sedan tvättas de från obundna antikroppar.

0,2 ml enzymsubstratlösning [ortofenylendiamin (CRF) eller

5-aminosalicylsyra - för peroxidas och p-nitrofenylfosfat - för alkaliskt fosfatas] och inkuberades i mörkret vid 20. 22 ºС 5. 30 min.

Reaktionen stoppas genom tillsats av 0,05 ml 2 N. svavelsyralösning (för peroxidas) och 3 M natriumhydroxidlösning (för alkaliskt fosfatas).

Beräkningen av resultaten är visuell eller spektrofotometrisk för att öka absorptionen vid en våglängd av 490 nm (peroxidas) eller 405 nm (alkaliskt fosfatas). Ämne OFD: positivt resultat - orange-brun färgning. 5-aminosalicylsyrasubstrat: positivt resultat - intensivt brunt.

För ett positivt resultat ta överskottsoptisk densitet för experimentproverna under kontrollen fem till sex gånger.

Detekteringen av antikroppar (i blodserum) är baserad på samma princip, men fastfasbäraren är sensibiliserad med ett känt antigen, behandlat med testserumet, därefter med ett antispecies immunoglobulin märkt med ett enzym. Ett substrat införs och en färgreaktion används för att bedöma närvaron eller frånvaron av antikroppar i testblodserum..

Uppgifter för oberoende arbete

1. Identifiera kulturen för patogener av brucellos och salmonellos direkt MFA.

2. Identifiera en tvåstegs MFA-kultur av Salmonella.

3. Att studera den mikroskopiska bilden med beaktande av resultaten av histokemisk ELISA (immunoperoxidas-test).

1. Vad är kärnan i enstegs, tvåstegs och trestegs MFA?

Vad är bättre och effektivare i laboratoriediagnostik - PCR eller ELISA?

PCR och ELISA är två diagnostiska metoder som har fått erkännande bland läkare. Båda studierna från kategorin molekylär biokemi är korrekta och pålitliga. Det finns en skillnad mellan PCR eller ELISA, som kännetecknar patologier bättre och mer sanningsenligt? För att besvara frågan är det värt att förstå kärnan i metoderna, identifiera likheter och skillnader i diagnostiska metoder.

Vad är PCR??

PCR är en mycket känslig polymeraskedjereaktion som upptäcker det orsakande medlet för sjukdomen (virus, bakterier, klamydia) i kroppen. Tekniken är baserad på bestämningen av den specifika strukturen av DNA närvarande i en infektion. PCR utförs med misstänkt latent kronisk förlopp för den smittsamma processen i kroppen, som är i latent form. Funktionerna och fördelarna med PCR inkluderar:

  • hög 100% känslighet för patogener av vilken typ som helst med närvaro av unika nukleinsyrafragment,
  • hastigheten för att få resultatet,
  • förmågan att bestämma antalet på en typ av patogen,
  • samtidig diagnos av flera patogener.

Laboratorieassistenter bestämmer enkelt DNA-strukturen för en enda patogen med användning av polymeraskedjereaktionen, vilket gör det möjligt att spåra och utvärdera resultaten av behandlingen efter förskrivning av läkemedelsbehandling. PCR, som en ny forskningsmetod, är nödvändig för diagnos av sådana sjukdomar:

  • tuberkulos,
  • difteri,
  • salmonellos,
  • HIV,
  • aIDS,
  • oberoende stadium hepatit C,
  • bacteriosis.

Noggrannheten av PCR som teknik når 99% med identifiering av patogener i det initiala skedet av kroppen i avsaknad av speciella symtom hos patienter. Detta säkerställer ett snabbt botemedel mot sjukdomar, vilket i vissa fall uppnår hållbar remission..

Vad är IFA?

ELISA är en immunforskningsmetod och en noggrann analys för att identifiera patologier i kroppen orsakade av smittsamma patogener. En studie föreskrivs för misstänkta:

  • syfilis,
  • hepatit B, C,
  • chlamydia,
  • toxoplasmos,
  • cytomegalovirus,
  • herpesvirus,
  • ureaplasmosis,
  • kvinnlig mykoplasmos.

En immunofer kan upptäcka onkologi i ett tidigt skede. ELISA föreskrivs för att upptäcka hormonnivån i blodet, diagnostisera sjukdomar i det endokrina systemet genom att upptäcka tumörmarkörer. En enzymimmunanalys har många fördelar:

  • enkelhet och hastighet att genomföra,
  • hög känslighet vid antigen-antikroppsreaktioner även mot bakgrund av en låg koncentration av patogenen i kroppen,
  • en hög specificitetsnivå för analysen, som gör att du snabbt kan upptäcka och etablera antigen-antikroppskomplexet, det enzym som används kommer att fungera som en etikett som exakt kan fånga interaktionssignalen mellan dem, känna igen immunoglobuliner (igm, igg antikroppar) i blodet.

När det gäller infektion av kroppen i det inledande stadiet dominerar immunglobuliner av klass M. När infektionen fortskrider binder antikroppar av klass A. Om sjukdomen går in i ett avancerat skede börjar produktionen av immunglobulin av klass G. Enzymreaktionen av immunglobulin kommer att avslöja svårighetsgraden av sjukdomen och utvecklingsstadiet av patologin.

Vad är skillnaden mellan ELISA och PCR??

PCR- och immunoanalysanalyser (ELISA) -analyser är lika efterfrågade för diagnostiska ändamål. Båda studierna har fördelar och nackdelar, likheter och skillnader..

  1. OM EN. Huvudriktningen är detektion av avfallsprodukter från markörproteiner eller etablering av kontakter mellan patogenen och immunsystemet. Refutation eller bekräftelse av spridningen av infektion i organen. Skillnaden mellan ELISA och PCR är lämpligheten för biomaterial för analys: ett vävnadsprov, saliv, urin, blod.
  2. PCR låter dig identifiera en specifik patogen som tillhör gruppen svampar, virus, bakterier. Den diagnostiska metoden för polymeras kommer att detektera en patogen organism i testmaterialet: vätska, vävnad, organ. För att få en storskalig bild av patologiska processer som förekommer i kroppen, föreskriver läkare omedelbart två typer av analyser i ett komplex. Detta är viktigt för detektering av könssjukdomar (patologier överförda genom sexuellt samlag).

För att exakt upprätta en sexuellt överförbar infektionssjukdom och nivån av antikroppar i blodet utförs först PCR, eftersom resultaten från en ELISA-studie är orimliga att ta som grund utan att erhålla primär data.

När antikroppar upptäcks i kroppen kan en ELISA ensam inte sägas entydigt: oavsett om den patologiska processen i kroppen fortskrider eller inte. Kanske var kontakterna med patogenen, men långt tidigare, och analysen kan ge ett falskt resultat.

Det är omöjligt att dra entydiga slutsatser om PCR eller ELISA, och vad som faktiskt är mer tillförlitligt. ELISA är en effektiv diagnostisk metod, men sannolikheten för att utveckla en sjukdom kan endast bekräftas med PCR, så det är rimligt att utföra båda studierna tillsammans. PCR är en mer exakt forskningsmetod, men i ett prov av vävnadsmaterial och i ett separat område av kroppen. Trots metodens noggrannhet uppstår ofta fel eftersom den smittsamma processen snabbt kan spridas över hela kroppen.

Att spåra framstegen, till exempel: klamydia längs livmoderhalskanalen, är svårt. Infektion kan inte förekomma i äggstockarna och äggledarna när ELISA-testet är positivt och PCR-testet är negativt. Det händer tvärtom. För att få ett 100% resultat görs båda testerna för PCR och ELISA bäst tillsammans..

Det händer att resultaten av PCR eller ELISA inte sammanfaller, vilket händer med långvarig kronisk infektion eller att kroppen vänjer sig vid dess effekt. I detta fall är ELISA negativ och PCR är positiv. Om det finns få mikrober i smet, men antikroppar bildas och titrarna förblir i blodet under lång tid även efter behandlingsförloppet, kommer ELISA att vara positiv och PCR-negativ.

Ofta ger metoder falska positiva falska svar när, till exempel: ELISA är positiv, PCR är positiv. Symtom på patienter beaktas om de har behandlats för infektioner. Det händer att PCR är negativt och ELISA är negativt.

Olika kliniska fall kräver en individuell strategi. Därför vilken analys som är bättre att utföra och mer exakt: PCR eller ELISA - beslutet fattas av den behandlande läkaren.

Det rekommenderas att kontrollera för dolda sexuellt överförda infektioner och ta tester med en partner. När allt kommer omkring händer det att den ena har en uttalad kurs i den inflammatoriska processen, och den andra inte ens har misstankar, vilket negativt påverkar sexlivet och orsakar misstro. Det är alltid bättre att konsultera en läkare och behandlas av båda parterna för att öka effektiviteten i behandlingsförloppet och minska terapitiden.

Till exempel: med ureaplasmosis och mycoplasmosis, goda resultat från behandlingen av inflammatoriska processer i bäckenet kan endast erhållas om en gemensam behandlingskurs tas.

Med hänsyn till funktionerna kan man dra slutsatsen att PCR-diagnostik och ELISA är olika, men båda metoderna kan pålitligt bestämma förekomsten av patologier. Men endast specialister kan identifiera skillnaden mellan metoderna, välja de verkliga och korrekta metoderna för diagnos, mer exakt ge en avkodning av de erhållna analysresultaten.

Läs mer om PCR-metoden från videon:

Publikationer Om Hjärtrytmen

Cotopril för tryck och hypertensiv kris

Läkemedelsbehandling för hypertoni förblir det enda sättet att snabbt eliminera störningar i det kardiovaskulära systemet. Hur man tar Cotopril tabletter från tryck, och om de kommer att hjälpa till med hypertensiv kris?

Behandling av potatis hemorrojder hemma

Irina Strukova: Flickor, säger de verkligen att rå potatis ibland används för proktologiska sjukdomar i ändtarmen? Jag läste att rektal suppositorier till och med kan göras.